高效液相色谱法测定食品及生物样品中的多胺含量

摘要

多胺是一种小分子碱性脂肪族化合物，广泛分布在人体内,存在于所有的活细胞中，是生命系统的必不可少成分，在细胞分裂和核苷酸和蛋白质的生物合成等方面多胺发挥着重要作用。此外，多胺含量水平与一些疾病有联系，如肿瘤迅速生长明显改变多胺生物合成和积累，导致体内多胺浓度增加，因此提前防御疾病，多胺可作为生物标记。
　　目前已有多种分离技术应用于多胺的分析，鉴于紫外检测器最常用，因此本研究采用柱前衍生化HPLC-UV法对多胺进行分析研究。
　　以本实验室合成的PPZ作为多胺的衍生化试剂，优化PPZ与多胺衍生反应条件及产物的色谱分离条件，建立了以1，6-己二胺为内标同时分析5种多胺的分析方法。此衍生反应条件温和（0.1M的硼砂水溶液作为碱性介质，60℃反应50min），过程简单，产物稳定性好，紫外吸收强。采用Diamonsil C18(2)（150mm×4.6mm，3μm）色谱柱，流动相为有机相（VCH3CN/VCH3OH=60/40）和水，程序梯度洗脱（有机相：水=78:12保持3min，到10min，有机相比率增至85％，到13min有机相比率增至95％，维持至18min），紫外检测波长λ=362nm，柱稳25℃，流速0.5mL/min，6种胺得到较好的分离。以线性、精密度、检出限等技术指标对方法进行验证，结果表明，6种多胺在检测范围内，呈良好的线性相关（R2=0.9985-0.9997），RSD<5.2%，最低检测限5×10-4μM。利用本法对实际样品啤酒、指甲、脚趾甲进行了测定，均取得了较为满意的结果。利用LC-MS对脚趾甲中多胺衍生产物定性分析时发现，在正离子模式下，多胺衍生物成多电荷状态，证明PPZ极易带正电荷，可见PPZ作为多胺衍生化试剂具有卓越的优点。

目录

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本文涉及英文缩略语

第一章 绪论

1.1 多胺的概述

1.1.1 人体中多胺的合成和代谢

1.1.2 多胺的生理学功能与生命健康关系

1.1.3 食品中的多胺及危害

1.2 同时检测多种多胺的分析方法研究

1.2.1 检测多胺的常用方法

1.2.2 实际样品前处理方法

1.3 本研究的立题依据及研究内容

第二章 柱前衍生RP-HPLC测定多胺含量分析方法的建立

2.1 引言

2.2 实验部分

2.2.1 仪器与试剂

2.2.2 实验方法

2.3 结果与讨论

2.3.1 PPZ和多胺的衍生化反应条件

2.3.2 色谱条件的优化

2.3.3 LC-MS确定多胺衍生产物结构信息

2.4 实验方法的验证

2.4.1 梯度程序稳定性

2.4.2 线性关系和检出限

2.4.3 精密度和稳定性

2.5 本章小结

第三章 实际样品中多胺含量的测定

3.1 引言

3.2 实验部分

3.2.1 仪器与试剂

3.2.2 标准液的配制

3.2.3 样品前处理

3.2.4 衍生化反应

3.2.5 色谱及质谱条件

3.3 结果与讨论

3.3.1 样品的前处理方法的优化

3.3.2 啤酒中多胺含量的检测

3.4 本章小结

参考文献

致谢

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附录