ET-1调控缺氧诱导ANP分泌的磷脂酰肌醇-3-激酶信号转导机制研究

摘要

目的:缺氧明显促进心房内皮素-1(endothelin-1，ET-1)的生成及其释放，并参与调节心房功能。然而，内源性ET-1调控心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide，ANP)分泌的具体机制尚不甚清楚。因此，本研究利用分子生物学、放射免疫、药理学等技术观察和探讨内源性ET-1调控缺氧诱导ANP分泌的磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)信号转导机制。
　　方法:本研究利用离体搏动的家兔心房灌流装置制备急性缺氧模型，采用放射免疫技术检测ET-1及ANP的含量，选用蛋白印迹技术(western blot，WB)分析内皮素A型和B型受体(endothelin receptor type A and B，ETRA and ETRB)的表达和Akt及GATA结合蛋白-4（GATA biding protein-4，GATA-4）含量的变化。
　　结果:1.急性缺氧明显促进家兔心房ET-1的释放(n=6，P＜0.001 vs.controlperiod)，并显著上调ETRA及ETRB表达(n=5，P＜0.001 and P＜0.01 vs.controlgroup)。同时显著增加心房ANP的分泌，并明显抑制心房搏出量和搏动压(n=6，P＜0.001 vs.control period)。2.ETRA和ETRB的抑制剂BQ123（0.3μmol/L）及BQ788（0.3μmol/L）明显减缓缺氧诱导ANP分泌的效应(n=6，P＜0.01 vs.controlperiod)。3.PI3K/Akt的抑制剂LY294002（30.0μmol）也可明显抑制缺氧诱导ANP分泌的作用(n=6，P＜0.001 vs.hypoxia)。4.急性缺氧明显增加磷酸化Akt(phospho Akt，pAkt)和GATA4的含量（均n=5，P＜0.001 vs.control）。5.BQ123和BQ788则可明显减缓缺氧增加pAkt(分别n=5，P＜0.05; P＜0.01 vs.hypoxia)及GATA4（分别n=5，P＜0.05; P＜0.001 vs.hypoxia）含量的效应。
　　结论:内源性ET-1通过ETR-PI3 K/Akt-GATA4信号转导通路调节缺氧诱导家兔心房ANP分泌的过程。

目录

声明

摘要

常用名词中英文对照和缩略语

第一章 前言

第二章 实验材料与方法

2．1 实验试剂以及溶液的配置

2．2 试剂配制

2．3 实验器材

2．4 实验动物

2．5 实验方法

2．6 实验步骤

2．7 统计学处理

第三章 实验结果

3．1 急性缺氧对心房ET-1、ANP分泌及其机械活动的影响

3．2 内源性ET-1对缺氧诱导ANP分泌的影响

3．3 PI3K／Akt信号通路对缺氧诱导ANP分泌的影响

3．4 内源性ET-1对缺氧诱导PI3K／Akt的影响

3．5 内源性ET-1对缺氧诱导GATA-4蛋白表达的影响

3．6 PI3／Akt对缺氧诱导心房GATA-4的影响

第四章 讨论

第六章 结论

参考文献

文献综述

致谢