促肾上腺皮质激素释放激素对小鼠小脑皮层分子层场电位反应的影响

摘要

[目的]
　　应用在体的电生理记录技术和神经药理学方法来研究促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)对感觉刺激诱发小鼠小脑皮层分子层场电位反应的影响机制。
　　[实验材料与方法]
　　选取周龄约为6-8的昆明小鼠，测量其体重并按照1.3g/kg的剂量在小鼠腹腔行乌拉坦麻醉。为了避免实验中小鼠呼吸道堵塞，待角膜反射消失后进行气管插管。将小鼠放置在定制的立体定位仪上，经一系列预处理后，小心的在小脑CrusⅡ区行钻孔术，直径约1-1.5mm，确保不伤及脑组织，并去除表面颅骨。在显微镜下小心取出硬脑膜，并使用蠕动泵将氧合的人造脑脊髓液（人造脑脊髓液，ACSF）连续滴注在暴露的脑表面。使用特殊的吹风机将头发(50-60毫秒，50-60磅/平方英寸)吹至同一胡须缓冲垫，作为由计算机刺激的三叉神经感觉，以控制头发刺激并同步电生理学记录;电生理记录选择分子层场电位，用于记录的电极填充ACSF20-30μL，使其电极阻抗为4-6MΩ。使用膜片钳放大器和数据软件记录分子层场电位的感觉刺激变化。数据分析使用Clampfit10.3软件进行。使用SPSS软件进行统计分析。使用T检验配对测试来比较施用前后的平均值。P＜0.05被认为有统计学意义。
　　[结果]
　　(1)在麻醉状态下，小鼠触角垫的毛发刺激引起小脑分子层的场电位反应，其表现为短负极性波（N1）后的大正极性波(P1);在脑表面灌流CRF(300 nM)后，小脑皮质分子层抑制性成分P1的振幅和半宽值均显著增加，与给药前比较差异显著（P＜0.05）。
　　(2)脑表面灌流CRF影响P1的波形动力学，导致上升时间缩短，延迟时间增加，二者给药前后比较均有显著性差异（P＜0.05）。
　　(3) CRF对吹风刺激诱发小鼠小脑分子层场电位的抑制性成分P1振幅值的影响具有浓度依赖性。浓度-反应曲线显示随着CRF浓度的增加，吹风刺激引起的P1的振幅值的增加程度越明显，引起感觉刺激变化的最小浓度是10 nM，最大浓度为1μM，半数有效浓度(EC50)为234 nM。
　　(4)在非选择性CRF-R阻断剂的存在下，CRF对对吹风刺激诱发小鼠小脑分子层场电位的抑制性成分P1振幅值的影响消失，P1的振幅值和半宽值没有升高，表明CRF通过活化CRF受体增加吹风刺激诱发小鼠小脑分子层场电位P1的振幅和半宽值。
　　（5)在CRF-R阻断剂的存在下，脑表面灌流CRF对P1的波形动力学没有显著影响，上升时间和延迟时间与给药前比较均没有显著性差异。
　　[结论]
　　CRF通过活化CRF-R增强感觉刺激诱发的小鼠小脑皮层分子层场电位的抑制性成分P1，影响其波形动力学，提示应激刺激可通过CRF受体作用于小脑皮层分子层神经环路，影响外部信息的整合与传递。

目录

声明

摘要

英文缩写词表

第一章 前言

2．1．1 实验动物

2．1．2 实验器材

2．1．3 试剂及药品

2．2 实验方法

2．2．1 麻醉与手术

2．2．2 分子层放电记录

2．2．3 统计学分析

第三章 结果

3．1 CRF对感觉刺激诱发分子层场电位反应P1振幅与波形下面积的影响

3．2 ORF对感觉刺激诱发分子层场电位反应P1影响的受体机制

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述 CRF在小脑皮层神经环路功能活动中的作用

致谢