欧前胡素通过p38MAPK/NF-κB途径对哮喘小鼠气道炎症的影响

摘要

目的:
　　观察欧前胡素对支气管哮喘小鼠模型气道炎症的影响，并探讨其可能机制是否与p38MAPK/NF-κB信号通路有关。
　　方法:
　　选取50只清洁级雄性BALB/c小鼠，随机分成5组，每组10只。分别为正常组、卵清蛋白哮喘模型组、欧前胡素低剂量组、欧前胡素高剂量组、地塞米松阳性对照组。建立OVA诱导的小鼠哮喘模型，分别用30mg/kg和10mg/kg欧前胡素和0.5mg/kg地塞米松治疗，对照组用生理盐水代替。在末次激发24h后取支气管肺泡灌洗液离心，取离心后的沉渣配成细胞悬液，经过细胞涂片后进行Diff-Quik染色行细胞计数和分类。BALF离心后的上清液用ELISA法检测上清液中IL-4、IL-5、IL-13的含量;取小鼠左肺组织切片后行HE染色和Masson染色观察其病理改变;采用免疫组织化学染色法观察NF-κBp65在肺组织中的含量;取小鼠右肺组织，提取蛋白后进行BCA定量，之后进行Western Blot检测p-p38MAPK及NF-kB p65的含量。
　　结果:
　　通过Diff-Quick染色观察及统计显示哮喘模型组小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞数、嗜酸性粒细胞数和淋巴细胞数较对照组明显增高，与正常对照组比较有明显差异(P＜0.05);经欧前胡素及地塞米松治疗后小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞数、嗜酸性粒细胞数和淋巴细胞数较模型组明显下降(P＜0.05)。通过ELISA检测哮喘模型组小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平较对照组明显增高，有明显差异(P＜0.05);经欧前胡素治疗后IL-4、IL-5、IL-13水平较模型组明显下降(P＜0.05)。通过HE、Masson染色观察小鼠的肺组织，模型组小鼠与正常组比较，黏膜下层增宽，气管管壁及肺泡可见破坏，肺泡腔及间质内炎性细胞浸润增多，气道周围胶原纤维沉积明显增多;经欧前胡素及地塞米松治疗后支气管及肺组织损伤较模型组明显减轻。通过免疫组织化学染色观察小鼠肺组织NF-κBp65表达结果显示，模型组与正常对照组比较小鼠支气管周围可见较多棕色的阳性细胞;经欧前胡素和地塞米松治疗后支气管周围阳性细胞数量较模型组比较明显减少。Western Blot检测显示，模型组小鼠肺组织p-p38MAPK和NF-κB p65含量较对照组显著增多(P＜0.05)，经欧前胡素及地塞米松治疗后小鼠肺组织p-p38MAPK和NF-κB p65蛋白含量降低(P＜0.05)。
　　结论:
　　欧前胡素能够减少IL-4、IL-5、IL-13含量，从而抑制哮喘小鼠气道炎症细胞浸润及胶原沉积，发挥了抑制气道炎症的作用。而其作用机制可能是通过调节p38MAPK/NF-κB信号通路而实现的。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 前言

第二章 实验材料和方法

2．1 材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 药品与试剂

2．1．3 仪器

2．2 方法

2．2．1 动物分组及哮喘小鼠模型的建立

2．2．2 标本收集

2．2．3 BALF细胞分类与计数

2．2．4 BALF中细胞因子含量测定

2．2．5 石蜡标本制备

2．2．6 HE染色

2．2．7 Masson染色

2．2．8 免疫组织化学染色

2．2．9 肺组织总蛋白提取

2．2．10 BCA蛋白定量

2．2．11 Western Blot检测

2．3 统计学方法

第三章 结果

3．1 欧前胡素改善小鼠气道炎症

3．1．1 欧前胡素减少了BALF中炎性细胞数量

3．1．2 欧前胡素减少哮喘小鼠模型BALF中细胞因子的含量

3．1．3 哮喘小鼠肺组织病理学变化

3．2 欧前胡素影响哮喘小鼠模型气道炎症的相关机制研究

3．2．1 欧前胡素能抑制小鼠肺组织中p38MAPK的磷酸化

3．2．2 欧前胡素能抑制小鼠肺组织中的NF-кB的活化

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

致谢

综述