东北刺人参不定根提取物抗氧化及抗炎特性的研究

摘要

东北刺人参是长白山区珍贵的药用植物之一，具有多种药用价值。近年来由于其野生资源遭到严重破坏，且人工栽培体系尚不成熟，致使东北刺人参植物材料严重缺乏，相关产品的开发受到限制。因此，急需寻求一种快速获取大量植物材料的有效途径。而植物组织培养是保存和扩繁濒危药用植物的核心技术，利用这种技术可快速获取大量东北刺人参不定根作为新植物材料具有重要的社会意义。东北刺人参不定根具有抗氧化及抗炎活性，但相关的研究尚处于初级阶段，因此，本研究以东北刺人参不定根为材料，利用不同极性溶剂所制备的提取物，研究其抗氧化及抗炎特性及其机制，为今后东北刺人参的相关产品开发提供理论基础。
　　在抗氧化试验中，通过评价东北刺人参不定根提取物的DPPH自由基清除能力、铁离子螯合能力和还原能力，探明抗氧化特性。结果表明甲醇粗提物(CE)和正己烷萃取物(n-Hex)、二氯甲烷萃取物(DCM)、乙酸乙酯萃取物(EtOAc)、正丁醇萃取物(n-BuOH)及水层浓缩物(Aqueous)均表现出不同程度的抗氧化特性，并呈现剂量依赖性。对各提取物抗氧化能力进行比较的结果，DPPH自由基清除能力和铁离子螯合能力的IC50值最小值及还原能力的OD值最大值均出现在EtOAc，表明乙酸乙酯萃取物抗氧化效果显著。
　　体内抗炎试验研究了不定根CE对LPS诱导的急性肺损伤模型小鼠的抗炎作用。结果发现浓度为200 mg·kg-1的CE显著(p＜0.01)抑制小鼠肺泡灌洗液中细胞浓度和一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)等促炎介质含量;肺组织病理观察结果发现，CE处理后，小鼠肺泡壁较完整性，炎性细胞浸润现象减轻。同时，发现CE处理后肺组织中谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性得到显著提高，而髓过氧化物酶活性和丙二醛含量得到明显抑制。体内抗炎研究的这些结果表明东北刺人参不定根甲醇粗提物具有较强的抗炎活性。体外抗炎试验中，研究了六种提取物(CE、n-Hex、DCM、EtOAc、n-BuOH和Aqueous)对LPS诱导的腹腔巨噬细胞(PMs)中NO含量的影响，发现六种提取物对NO均有明显的抑制效果，DCM和EtOAc抑制效果最显著。对DCM和EtOAc进行进一步的抗炎研究，结果发现两种萃取物对前列腺素E2、TNF-α、IL-6和IL-1β的抑制效果具有剂量依赖性的降低作用;对一氧化氮合酶和环氧合酶-2蛋白表达量同样具有抑制作用。本文同时对MAPK和NF-κB信号通路的抗炎机制进行了研究，在MAPK信号通路中，DCM和EtOAc明显抑制p38、JNK和ERK三种蛋白的磷酸化;而在NF-κB信号通路中，DCM和EtOAc可显著促进IκB-α蛋白表达，并抑制NF-κB易位至细胞核中，表明DCM和EtOAc通过调控MAPK和NF-κB炎症信号通路，从而产生抗炎效果。

目录

声明

摘要

英文缩写词表

前言

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．2 试验方法

1．2．1 不定根提取物的制备及其有效物质的测定

1．2．2 抗氧化研究

1．2．3 抗炎研究

1．2．4 测定方法

1．3 数据分析

2 结果与分析

2．1 不定根提取物的抗氧化研究

2．1．1 不定根提取物对DPPH自由基清除能力的影响

2．1．2 不定根提取物对铁离子鳌合能力的影响

2．1．3 不定根提取物对还原能力的影响

2．1．4 抗氧化能力与乙酸乙酯萃取物中有效物质的相关性分析

2．2 不定根提取物的抗炎研究

2．2．1 体内抗炎研究

2．2．2 体外抗炎研究

3．讨论

3．1 药用植物萃取物及其有效成分

3．2 抗氧化特性研究

3．3 抗炎特性研究

4．结论

参考文献

致谢