应用基因沉默技术改良花生脂肪酸组份

摘要

花生是重要的经济作物，其品质改良育种对国民的生产实践具有重要的意义。应用传统的育种技术随机性大，周期长，特定成分提高幅度有限，农业性状难以综合。基因工程的出现，为作物的品种改良育种提供了一个高效的技术手段，可以大大地缩短育种周期和提高育种效率。因此，应用基因工程技术对花生脂肪酸组份进行品质改良目前也是诸多学者的研究目标。 油酸是一种单不饱和脂肪酸，稳定性高，能降低有害胆固醇(低密度脂蛋白)，保持有益胆固醇(高密度脂蛋白)的水平，从而减缓动脉粥样硬化，预防冠心病等心血管疾病的发生。因此，提高花生种子油酸的相对含量，增加油酸/亚油酸的比值，提高花生的营养价值和氧化稳定性，已成为目前我国乃至国际上花生品质改良育种的重要内容。 本研究旨在利用hpRNA介导的基因沉默技术抑制花生种子中一个重要的脂肪酸脱氢酶基因——编码油酰磷脂酰胆碱ω-6脱氢酶基因ahFAD2B的表达，从而提高油酸的含量，改善花生脂肪酸的组成。研究结果如下： 1构建了种子特异表达的转化载体pPNHO-3。根据GeneBank公开发表的ahFAD2B基因序列设计特异引物进行PCR，将扩增出的基因片段正反连接到含有intron部分序列的中间载体的两端，构成反向重复序列，并将其克隆到含有大豆凝集素启动子和终止子基因的质粒，构建成转化载体pPNHO-3。 2建立了农杆菌介导ahFAD2B导入花生遗传转化体系。选择花生子叶为转化外植体，在芽诱导，分化和诱导生根等培养过程中，确立了125mg/L卡那霉素浓度为合适的筛选压力。培养基中Vc的浓度为2mg/L时可以有效的防止外植体褐化。 3通过对T0.和T1代转化株的PCR检测，表明目的片段已整合到植物基因组中。现已得到37株转化株，初步检测结果表明有11株为阳性转化株，其中4株结实，种子的油酸含量正在检测中。 4优化和改进了花生遗传转化的技术，如抗生素选择、防止褐化和品种基因型，并为提高转化效率提出了可行性建议。

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