GNA单克隆抗体的制备及在检测GNA转基因大豆方面的应用

摘要

本文制备了抗GNA的单克隆抗体，并把它用于对GNA转基因大豆的检测。 首先，采用从SIGMA公司购得的GNA纯品免疫BALB/c小鼠，每次8gg，共免疫4次。加强免疫后第四天取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。融合率为5％，阳性率为20.8％。通过4次有限稀释克隆获得了一株抗GNA的杂交瘤细胞株，命名为2D8。以GNA纯品通过Western Blot法和间接ELISA法对单抗2D8进行检测，证明了单抗2D8确实是与GNA蛋白特异性结合的。用间接ELISA法测定腹水的效价为1：400。 采用改良的CTAB法提取GNA转基因大豆的基因组DNA，以根据GNA的全长序列设计的引物进行PCR反应，以非转基因大豆基因组作为阴性对照，证明了GNA转基因大豆中确实整合了GNA的基因。 提取GNA转基因大豆的可溶性蛋白，用单抗2D8对其进行间接ELISA法检测，并以非转基因大豆的可溶性蛋白作为阴性对照，结果证明了GNA转基因大豆确实表达了GNA蛋白，并测得其表达的GNA蛋白占其可溶性蛋白的0.1％左右。进一步利用单抗2D8对GNA转基因大豆的可溶性蛋白进行了Western Blot法检测，同样以非转基因大豆的可溶性蛋白作为阴性对照，也在GNA转基因大豆中检测到了转入GNA基因的表达。 这些结果都为建立一套可以在蛋白水平上，更快捷更准确的对转基因植物进行检测的方法提供了基础。

目录

文摘

英文文摘

声明

1.引言

1.1雪花莲凝集素概述

1.1.1植物凝集素

1.1.2雪花莲凝集素

1.1.3雪花莲凝集素的生物学功能

1.2 GNA转基因植物的检测

1.2.1 GNA转基因植物检测的现状

1.2.2单克隆抗体技术原理

1.2.3间接法ELISA技术原理

1.2.4 Western Blot法技术原理

1.3立题依据

2.材料和方法

2.1材料

2.1.1动物材料

2.1.2细胞株

2.1.3化学试剂

2.1.4引物

2.1.5培养基

2.2实验方法

2.2.1 GNA单克隆抗体的制备

2.2.2 GNA转基因大豆的检测

3.结果

3.1 GNA单克隆抗体的制备

3.1.1 BALB/c小鼠的免疫效果

3.1.2 GNA抗体血清效价的检测

3.1.3 抗GNA杂交瘤细胞株的建立

3.1.4 GNA单克隆抗体效价的检测

3.1.5 抗GNA单克隆抗体的亚型鉴定

3.2 GNA转基因大豆的检测

3.2.1改良的CTAB法提取大豆的基因组DNA

3.2.2对转GNA大豆的基因组进行PCR检测

3.2.3间接ELISA法检测

3.2.4 Western Blot法检测

4讨论

5结论

参考文献

致谢