肿瘤患者血清白色念珠菌热休克蛋白90（HSP90）表位H特异抗体的ELISA检测

摘要

白色念珠菌是一种寄生于健康人体的正常菌群，在机体的免疫力下降或者正常菌群失调的情况下，就会转变成致病菌。目前免疫抑制剂的应用以及肿瘤患者的化疗等介入治疗方法的使用，增加了病人对念珠菌的易感性，使医院内患者念珠菌感染的发病率不断增加，但是目前临床对白色念珠菌感染的检测方法费时且不灵敏，因此迫切需要一种简便有效的检测方法。 热休克蛋白90(HSP90)是白色念珠菌在侵染机体过程中分泌的一种毒性因子，同时，作为念珠菌的一种免疫优势抗原，可以诱导感染机体产生特异性抗体。Matthews等和本实验室先前的工作证明，抗HSP90的抗体是一种保护性抗体。 本课题组已经成功构建了展示有HSP90表位H的杂合噬菌体，并保存了该重组质粒。 本实验首先将我们已经成功构建了展示有HSP90(热休克蛋白90)表位H的重组质粒表达并纯化，确定其免疫原性，之后将其作为固相包被抗原建立ELISA检测体系，并使用该体系检测706名白色念珠菌易感人员(肿瘤患者)的血清，得到的结果如下： 1.表达并纯化的展示有HSP90表位H的杂合噬菌体能与白色念珠菌感染患者血清中的相应抗体发生特异性结合，说明我们的杂合噬菌体可以用来检测白色念珠菌的感染。 2.确定该ELISA检测的条件为：包被浓度70μg/ml，抗体稀释倍数200倍，cut-off值为1.5。 3.706名肿瘤患者的检测结果为31例为阳性，其中有2例后来被临床检测为白色念珠菌感染。此31例再次经过Western blot方法检测，其中有18例被Western blot方法检测为阳性，说明我们的方法是有效的，有希望为临床白色念珠菌的诊断提供行之有效的检测方法。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

一、系统性白色念珠菌感染及检测现状

(一)热休克蛋白90(HSP90)

(二)白色念珠菌感染检测进展

二、噬菌体展示技术

(一)丝状噬菌体fd的形态特征及增殖特点

(二)噬菌体展示技术概述

(三)噬菌体展示技术的优点

(四)噬菌体展示技术的应用

三、本研究的内容和意义

材料和方法

一、实验材料

二、实验方法

(一)杂合噬菌体的制备及分析

(二)ELISA方法的建立及对100例系统性白色念珠菌易感病人血清的检测

实验结果与讨论

一、实验结果

(一)杂合噬菌体的制备及分析

(二)ELISA方法的建立及对706例系统性白色念珠菌易感病人血清的检测

二、讨论

结论

参考文献

致谢

发表论文及参加项目情况