20-HETE通过PKA和PKC介导的大鼠心室肌细胞L-型钙通道活化改变肌力效应

摘要

细胞色素P450s（CYP）ω—羟化酶的花生四烯酸代谢物，20—羟二十烷四烯酸（20—HETE），具有重要的血管紧张度调节作用，但是关于20—HETE对心脏的作用报道甚少。我们研究了外源20—HETE对大鼠心肌收缩力的调节作用及其机制。利用Langendorff离体灌流系统研究了20—HETE对离体心脏心肌力学的效应，发现低剂量的20—HETE（0．1-3 nmol/L）对灌流心脏具有正性肌力作用，而高剂量（10 nmol/L）则具有明显的负性作用。接着我们利用Fura-2/AM荧光测定和膜片钳技术，研究20—HETE对大鼠分离心室肌细胞内钙浓度（[Ca2+]i）和L—型钙离子通道的效应。我们发现低剂量的20—HETE（0．01，0．03，0．1μmol/L）以剂量依赖的方式升高[Ca2+]i，而高剂量的20—HETE（0．3，1μmol/L）诱导[Ca2+]i的降低。并且，低剂量的20—HETE（0．1μmol/L）诱导全细胞L—型钙离子通道电流幅度的升高，而高剂量的20—HETE（1μmol/L）具有相反的效应。用激光共聚焦显微镜的线扫描功能检测20—HETE对心肌细胞钙瞬变的影响，发现低浓度的20—HETE（0．01，O．1μmol/L）可以升高钙瞬变的幅度，并明显延长钙瞬变下降相的时程；高浓度的20—HETE（1．0μmol/L）可以降低钙瞬变的幅度，延长钙瞬变的时程。上述20—HETE诱导的[Ca2+]i、全细胞L—型钙离子通道电流、钙瞬变幅度的增加等效应，可被蛋白激酶C（PKC）抑制剂白屈菜红碱和cAMP依赖蛋白激酶（PKA）抑制剂H-89阻滞。PKC和PKA活性测定的结果表明20—HETE（0．03μmol/L）增加心肌细胞PKC和PKA的活性，并且白屈菜赤碱（5μmol/L）和H-89（5μmol/L）抑制该效应。这些数据提示20—HETE可能通过激活或抑制L—型钙通道来调节[Ca2+]i，从而调节心肌细胞收缩力，并且这些效应由PKC和PKA介导。

目录

文摘

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论文说明：英文缩写

声明

引 言

材料与方法

1实验动物

2主要药品与试剂

3实验仪器

4实验方法

4.1大鼠离体心肌力学指标的测定

4.2成年大鼠心室肌细胞分离

4.3心肌细胞内钙浓度的测定

4.4大鼠心肌细胞离子通道电流的测定

4.5心肌细胞钙瞬变的测定

4.6 PKC和PKA活性测定

4.7统计学方法

结 果

1 20-HETE对心肌力学的影响

2 20-HETE对分离心肌细胞[Ca2+]i的影响

3 20-HETE对分离心肌细胞L-型钙电流的影响

3.1心肌细胞L-型钙电流的鉴定

3.2 20-HETE(0.1 μ mol／L)对心肌细胞L-型钙电流的激活和失活曲线的影响

3.3 20-HETE(0.1 μ mol／L)对心肌细胞ICaL的影响

3.4 20-HETE(1 μ mol／L)对心肌细胞ICaL的影响

4 20-HETE对分离心肌细胞钙瞬变的影响

5 PKC和PKA参与到20-HETE对心肌细胞钙调控的影响中

5.1 PKC和PKA参与了20-HETE-诱导的心肌细胞[Ca2+]i的增加

5.2 PKC和PKA参与了20-HETE-诱导的心肌细胞ICaL的增加

5.3 PKC和PKA参与了20-HETE-诱导的心肌细胞钙瞬变动力学的改变

5.4 20-HETE对心肌细胞PKC和PKA活性的影响

讨 论

结论及创新点

参考文献

致 谢

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