重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)免疫调节及抗癌机制初步研究

摘要

Ling Zhi-8（LZ-8）是一种从灵芝（Ganoderma lucidium）菌丝体中提取出的真菌免疫调节蛋白。LZ-8具有免疫调节活性，可以促进人外周血淋巴细胞和人外周血单个核细胞以及小鼠脾细胞的增殖，诱导分泌白细胞介素，肿瘤坏死因子和干扰素等细胞因子，以及调节免疫活性细胞黏附分子的表达，并且LZ-8具有抗肿瘤活性。目前其作用机制尚未完全清楚。
　　 本文通过毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统来表达重组灵芝免疫调节蛋白（rLz-8），经过纯化的rLZ-8用绵羊红细胞凝血实验以及小鼠脾淋巴细胞增殖实验来检测其生理活性，得到了高纯度并且具有稳定生理活性的rLZ-8样品。用异硫氰酸荧光素（FITC）对rLZ-8进行荧光标记，将标记后的FITC-rLZ-8分别与人外周血淋巴细胞（HPBL），小鼠脾细胞，293T细胞，A549细胞进行共培养，利用激光共聚焦显微镜观察rLZ-8在这些细胞中的亚细胞定位，结果发现rLZ-8在有些HPBL的细胞膜上富集，而在有些HPBL细胞的内部富集，仅在小鼠脾细胞的细胞膜上分布，仅在293T与A549细胞内部分布，说明rLZ-8与不同细胞的作用方式和作用位点有所不同。
　　 利用MTT法测定rLZ-8对A549细胞增殖的影响，结果显示rLZ-8能够抑制A549细胞的增殖并且与rLZ-8的剂量和作用时间呈正相关。进一步对与rLZ-8共培养的A549细胞进行衰老相关的[β]-半乳糖苷酶（SA-[β]-Gal）染色实验，结果表明与rLZ-8共培养的A549细胞表现出早熟衰老的特征，说明rLZ-8可能通过诱导A549细胞的早熟衰老来抑制其增殖。
　　 本文表达和纯化了rLZ-8，得到了高纯度并且具有稳定生物活性的rLZ-8样品，为大规模获得rLZ-8从而进一步研究LZ-8的功能和作用机制以及在临床上的应用奠定了基础。并且利用FITC荧光标记技术对rLZ-8在几种细胞中的亚细胞定位做了初步的探索，同时发现rLZ-8对人类肺癌细胞A549的增殖有抑制作用，其原因可能是由于rLZ-8诱导了A549细胞发生早熟衰老，本实验的研究结果，为rLZ-8发挥免疫调节作用以及抗肿瘤活性提供了可能的机制，对rLZ-8在抗肿瘤方面的应用提供了一定的理论支持。

目录

文摘

英文文摘

1 引言

1.1 真菌免疫调节蛋白

1.2 灵芝免疫调节蛋白

1.3 真菌免疫调节蛋白免疫调节功能以及抗癌活性机制研究概况

1.4 本实验研究目的

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 结果与分析

3.1 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)的诱导表达和纯化

3.2 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)的生物活性测定

3.3 FITC荧光标记的rLZ-8与几种细胞相互作用时的亚细胞定位

3.4 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)能够抑制A549细胞增殖

3.5 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)能够诱导A549细胞发生早衰

4 讨 论

4.1 利用毕赤酵母表达重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)

4.2 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)的亚细胞定位

4.3 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)的抗肿瘤机制

5 结 论

参考文献

致 谢