铁皮石斛组培快繁技术的优化

摘要

铁皮石斛（Dendrobium candidum Kimura et Migo）又名黑节草、铁皮兰，为兰科石斛属多年生附生型草本植物。其药用价值独特，是石斛属中的极品。目前通过组织培养技术已成功获组培苗，但是组培快繁过程中仍存在许多问题:组培苗易黄化、易产生变异、移栽成活率不高等。本研究以铁皮石斛的成熟果实和茎段为材料，采用正交试验设计，对其组培快繁技术进行优化，以期为铁皮石斛的组织培养和规模化生产提供理论参考和技术支持。主要研究结果如下:
　　(1)种胚萌发最适培养基:MS或1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L+椰汁100ml/L+活性炭1.0g/L+白糖25g/L+琼脂4.6g/L，植物生长调节剂与天然有机物椰汁的添加能缩短铁皮石斛种胚的萌动时间。
　　(2)外值体最优灭菌方法:经预处理的铁皮石斛茎段在流动的自来水下冲洗30min，用75％酒精浸泡30s，再用10％ NaClO8min+0.1％ HgCl25min+0.2％HgCl22min综合灭菌，经该组合处理的外植体在培养30d后仍未发现有污染。
　　(3)腋芽诱导最优培养基:MS+NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+白糖25g/L+琼脂4.6g/L，茎段诱导率达85％。
　　(4)丛生芽诱导最优培养基:MS+NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+KT2.0mg/L+白糖25g/L+琼脂4.6g/L，此培养基诱导的丛生芽数量最多，叶色浓绿、植株健壮，且新芽的变异率居中。
　　(5)增殖最优培养基:1/2MS+NAA1.0mg/L+6-BA0.2mg/L+KT0.2mg/L+活性炭0.5g/L+5％土豆汁+白糖25g/L+琼脂4.6g/L，增殖系数达8.3，原球茎生长紧凑、绿色、且无变异和褐化现象。
　　(6)分化最优培养基:N6+6-BA0.5mg/L+KT1.0mg/L+土豆汁100g/L+活性炭0.5g/L+白糖25g/L+琼脂4.6g/L，分化率达87.7％，不定芽数量多、健壮度和整齐度均匀、叶绿。
　　(7)壮苗最优培养基:N6+6-BA0.5mg/L+NAA1.0 mg/L+香蕉汁150g/L+活性炭0.5g/L+白糖25g/L+琼脂4.6g/L，试验研究结果表明:处理8中的4个评价指标（新芽增长数量、单株鲜重、株高及茎粗）综合评分结果最好，达34.796。
　　(8)生根最优培养基:MS+NAA2.0mg/L+活性炭1.0g/L+香蕉汁150g/L+白糖25g/L+琼脂4.6g/L，苗生长健壮，根多且粗，平均根长3.5cm，平均生根数6.3条/株。生根组培苗移栽成活率高，达95％以上。

目录

声明

摘要

1 绪论

1．1 铁皮石斛的生物学特性及资源分布

1．2 铁皮石斛的药用价值

1．3 铁皮石斛组培快繁技术的研究进展

1．3．1 外植体的选择

1．3．2 再生植株的途径

1．3．3 基本培养基的选择

1．3．4 植物生长调节剂对铁皮石斛原球茎增殖与分化的影响

1．3．5 培养基添加物、碳源及糖源对铁皮石斛原球茎增殖和分化的影响

1．3．6 生根壮苗

1．4 研究的目的和意义

2 铁皮石斛初代培养技术研究

2．1 材料

2．1．1 供试材料

2．1．2 培养基调制

2．2 方法

2．2．1 种胚萌发试验

2．2．2 外植体消毒

2．2．3 茎段腋芽诱导

2．2．4 茎段丛生芽诱导

2．3 结果与分析

2．3．1 种胚萌发试验培养基的筛选

2．3．2 外植体最优灭菌方法筛选

2．3．3 茎段腋芽诱导最优培养基筛选

2．3．4 茎段丛生芽诱导最优培养基筛选

2．4 小结与讨论

2．4．1 小结

2．4．2 讨论

3 铁皮石斛继代培养技术优化研究

3．1 材料

3．1．1 供试材料

3．1．2 培养基调制

3．2 方法

3．2．1 原球茎增殖培养

3．2．2 原球茎分化培养

3．3 结果与分析

3．3．1 原球茎增殖最优培养基筛选

3．3．2 原球茎分化最优培养基筛选

3．4 小结与讨论

3．4．1 小结

3．4．2 讨论

4 铁皮石斛壮苗培养技术优化研究

4．1 材料

4．1．1 供试材料

4．1．2 培养基调制

4．2 方法

4．2．1 试验设计

4．2．2 试验工具及仪器

4．2．3 接种方法

4．2．4 培养条件

4．2．5 评价指标

4．2．6 测定方法

4．2．7 数据处理

4．3 结果与分析

4．3．1 正交试验结果

4．3．2 直观分析结果

4．3．3 方差分析结果

4．3．4 壮苗最优培养基的确定

4．4 小结与讨论

4．4．1 小结

4．4．2 讨论

5 铁皮石斛生根培养技术优化研究

5．1 材料与方法

5．1．1 供试材料

5．1．2 培养基调制

5．2 方法

5．2．1 生根培养

5．2．2 生根苗移栽

5．3 结果与分析

5．3．1 生根培养最优培养基的筛选

5．3．2 生根苗移栽

5．4 小结与讨论

5．4．1 小结

5．4．2 讨论

6 结论与展望

6．1 结论

6．2 存在问题

6．3 展望

参考文献

附录

攻读农业推广硕士学位期间的主要学术成果

致谢