蚬壳花椒主要有效成分的提取制备工艺及其相关生理活性研究

摘要

蚬壳花椒（Zanthoxylum dissitum Hemsl），中药名单面针，芸香科花椒属木质藤本植物，能解毒消肿、祛风活络、散瘀止痛，是很多中成药生产的原材料。由于蚬壳花椒有效成分及其生理活性研究的不足，蚬壳花椒不能得到科学合理利用，致使其有效成分利用率低，药用价值开发受到限制，造成一定的资源浪费。蚬壳花椒目前完全处于野生状态，自然生境面较窄，且自然繁殖率低，生长缓慢，自然资源有限，再加上人们的掠夺式开发，蚬壳花椒已成为渐危物种。为科学合理利用蚬壳花椒药材，进一步开发其药用价值，缓解蚬壳花椒资源危机，本课题研究了蚬壳花椒中主要有效成分的提取制备工艺及其相关生理活性，主要研究结果如下:
　　(1)通过单因素试验和L9（34）正交试验研究了蚬壳花椒总生物碱的提取工艺，确定了总生物碱提取的最优工艺参数为:用20倍量80％乙醇浸泡24h，50℃超声提取1.5h，过滤，重复提取1次，用此工艺条件，总生物碱提取率为11.82mg/g。通过筛选，选择NKA-9树脂用于总生物碱的分离纯化，具体工艺条件为:生药与树脂比为1∶1（g/g），调节上样液pH为7.0，上样流速2BV/h，洗脱时，用6BV80％乙醇以2BV/h进行洗脱，所得总生物碱平均纯度为32.9％。
　　(2)选择影响总黄酮提取的因素，进行L9(34)正交试验，得到总黄酮的最佳提取条件为:采用15倍量(mL/g)的70％乙醇浸泡24h，50℃超声提取1.5h，重复提取1次，最大提取率达到4.78mg/g。选用AB-8型树脂用于总黄酮的分离纯化，最佳工艺条件为:上样液浓度为1.5mg/mL，pH值为6.0，流速2.0mL/min，洗脱时采用140mL70％乙醇，2mL/min进行动态解吸附。对该工艺条件提取纯化的总黄酮进行纯度鉴定，纯度达69.57％。
　　(3)通过开展单因素试验和L9（34）正交试验研究蚬壳花椒蒽醌的提取工艺，确定蒽醌类物质提取的最优条件为:用15倍量50％乙醇浸泡24h，60℃超声提取40min，提取两次，蒽醌类化合物提取率可达1.59mg/g。通过筛选，S-8型树脂最适于蒽醌类物质的分离纯化，最优工艺参数为:用pH为9.0、浓度为0.8mg/mL的蒽醌提取液以2BV/h进行动态吸附，吸附完成后用80％乙醇以3BV/h进行解吸附，分离纯化后蒽醌类化合物纯度达到45.5％。
　　(4)通过K-B琼脂扩散法（纸片法）和最小抑菌浓度法探究了蚬壳花椒中各组分的抑菌活性，结果表明，总生物碱对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有较强的抑制能力，MIC分别为0.8 mg/mL、0.4 mg/mL;总黄酮对金黄色葡萄球菌的抑制能力较强，对大肠杆菌的抑制能力弱，MIC分别为0.4 mg/mL、1.6mg/mL;蒽醌类物质对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制能力均较弱，在较高浓度下才表现出抑菌活性。
　　(5)开展各组分对DPPH和羟基自由基清除率的研究，并与常用天然抗氧化剂Vc比较，结果表明Vc及蚬壳花椒各组分抗氧化能力的大小依次是Vc＞总黄酮＞总生物碱＞蒽醌，说明蚬壳花椒各组分中蒽醌类化合物抗氧化能力较弱，黄酮类化合物抗氧化能力较强，但均弱于Vc。

目录

声明

摘要

1 绪论

1．1 蚬壳花椒研究概况

1．1．1 蚬壳花椒生物学特性研究

1．1．2 蚬壳花椒资源繁育

1．1．3 蚬壳花椒有效成分研究

1．2 植物有效成分提取技术研究进展

1．2．1 基本原理与传统提取技术

1．2．2 植物有效成分提取的新技术

1．3 植物主要有效成分生理活性研究进展

1．3．1 生物碱类化合物生理活性研究进展

1．3．2 黄酮类化合物生理活性研究进展

1．3．3 蒽醌类化合物生理活性研究进展

1．4 研究目的与研究内容

1．4．1 课题来源

1．4．2 研究目的与意义

1．4．3 研究内容及技术路线

2 蚬壳花椒总生物碱的提取制备工艺研究

2．1 材料与仪器

2．2 实验方法

2．2．1 蚬壳花椒总生物碱提取工艺的单因素试验

2．2．2 蚬壳花椒总生物碱提取工艺的优化

2．2．3 应用大孔树脂分离纯化蚬壳花椒总生物碱工艺研究

2．3 结果与分析

2．3．1 蚬壳花椒总生物碱提取工艺的单因素试验研究

2．3．2 蚬壳花椒总生物碱提取工艺的优化研究

2．3．3 应用大孔树脂分离纯化蚬壳花椒总生物碱工艺研究

2．4 小结

3 蚬壳花椒总黄酮的提取制备工艺研究

3．1 材料与仪器

3．2 实验方法

3．2．1 蚬壳花椒总黄酮提取工艺优化研究

3．2．2 应用大孔树脂分离纯化蚬壳花椒总黄酮工艺研究

3．3 结果与分析

3．3．1 蚬壳花椒总黄酮提取工艺优化研究

3．3．2 应用大孔树脂分离纯化蚬壳花椒总黄酮工艺研究

3．4 小结

4 蚬壳花椒葸醌类物质的提取制备工艺研究

4．1 材料与仪器

4．2 实验方法

4．2．1 蒽醌类物质提取方法的单因素试验

4．2．2 蚬壳花椒蒽醌类物质提取工艺的优化研究

4．2．3 应用大孔树脂分离纯化蚬壳花椒蒽醌类物质工艺研究

4．3 结果与分析

4．3．1 蚬壳花椒蒽醌类物质提取的单因素试验研究

4．3．2 蚬壳花椒蒽醌类物质提取工艺的优化研究

4．3．3 应用大孔树脂分离纯化蚬壳花椒蒽醌类物质工艺研究

4．4 小结

5 蚬壳花椒主要有效成分的生理活性研究

5．1 材料与仪器

5．2 实验方法

5．2．1 蚬壳花椒主要有效成分的抑茵活性研究

5．2．2 蚬壳花椒主要有效成分的抗氧化活性研究

5．3 结果与分析

5．3．1 蚬壳花椒主要有效成分抑菌活性研究

5．3．2 蚬壳花椒主要有效成分抗氧化活性研究

5．4 小结

6 结论与创新点

6．1 结论

6．2 创新点

6．3 展望

参考文献

攻读硕士期间参与发表的论文

致谢