细胞周期蛋白cyclinD1和细胞周期调节因子p53参与鼻咽癌变的分子机制探讨

摘要

该研究运用变性高效液相色谱（denaturinghighperformanceliquidchromatography,DHPLC）法结合DNA双向测序,通过比较鼻咽癌患者与正常人群间cyclinD1基因型的频率分布,发现在鼻咽癌患者中AG+GG型者显著高于对照人群,而AA型基因则显著低于正常对照,提示携带有AG和GG型基因的个体（以编码转录本a较多）比AA型基因个体（主要产生转录本b）对鼻咽癌危险因素更敏感,更倾向于患鼻咽癌.这一研究结果将基因不稳定性直接与细胞周期蛋白联系起来,从而为更深入地研究cyclinD1参与鼻咽癌变分子机制提供了新的实验依据并开拓了一个新的研究视野.我们的研究结果已经表明EBV-MLP1通过活化NF-κB和AP-1两条信号传导途径,引起p53蛋白积聚并上调其转录活性,而我所以往用cDNAarray及RT-PCR的方法也证实在鼻咽癌组织中p53和mdm2的mRNA均表达上调,因此LMP1诱导p53蛋白积聚最可能的机制为LMP1活化的NF-κB和AP-1与p53基因的启动子结合,上调p53基因的转录,其中尤以NF-κB对p53蛋白的转录调节作用更为活跃,但也不排除NF-κB和AP-1信号通路通过其他的机制影响p53蛋白的稳定性及其活性.该研究结果还显示：阻断NF-κB和AP-1这两条信号传导通路后,p53蛋白的量及其转录活性均较LMP1诱导状态下有较明显的下调,而cdc2/cyclinB激酶活性的上调幅度以及G<,2>/M期阻滞的恢复程度则均稍弱于p53蛋白的变化程度.因此,不排除MLP1通过其激活的信号传导还引起非53依赖性G<,2>/M期阻滞.对其进一步的探索必将为更深入地认识EBV-LMP1激活的信号传导通路及其导致的细胞周期紊乱、乃至参与肿瘤发生的机制提供新的线索.

目录

资助

英文缩写注解

前言

第一部分探讨cyclin D1基因型与鼻咽癌遗传易感性之间的关系

一、材料

二、主要方法

三、结果

1.PCR方法扩增cyclin D1基因的第4外显子

2.用DHPLC法结合DNA测序确定cyclin D1的基因型

3.比较NPC患者与正常人群间cyclin D1基因型的频率分布

四、分析与讨论

参考文献

第二部分确定LMP1通过活化NF-κ B和AP-1激活p53蛋白依赖性G2/M期阻滞

一、材料

二、主要方法

三、结果

1.建立TAM67稳定表达的鼻咽癌细胞系HNE2-LMP1-TAM67

2.确定LMP1可诱导p53蛋白积聚并上调其转录活性

3.确定LMP1通过NF-κB和AP-1两条信号传导通路导致p53蛋白积聚并上调其转录活性

4.确定LMP1通过NFκB和AP-1两条信号传导途径导致p53依赖性G2/M期阻滞

四、分析与讨论

参考文献

结论

综述一：Cyclin D1的多态性与肿瘤

综述二：哺乳动物细胞中cyclin的转录调控

致谢

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