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实验技术路线图
前言
第一章人类精子蛋白质组学研究技术平台的建立
1材料和方法
1.1材料
1.2精子蛋白质的抽提
1.3精子蛋白质的双向电泳
1.4蛋白质点的胶内酶切
1.5质谱分析
1.6数据库查询
2结果
2.1精子蛋白双向电泳条件的优化
2.2精子蛋白质图谱上斑点的鉴定
3讨论
3.1精子蛋白质双向凝胶电泳技术的研究现状
3.2对于精子蛋白不同蛋白质抽提方法的比较
3.3不同上样量的比较
3.4不同等电聚焦方法的比较
3.5不同的第二向电泳方法的比较
3.6质谱技术的讨论
附 图
第二章人类精子比较蛋白质组学研究技术的应用——正常精子和圆头精子的差异表达蛋白的分离与鉴定及转录水平的研究与编码基因的突变分析
1材料与方法
1.1材料与试剂
1.2异常精子的相关形态检查
1.3精子蛋白质的提取和双向电泳
1.4蛋白质点的胶内酶切
1.5质谱分析
1.6数据库查询
1.7精子RNA的提取和部分差异蛋白表达情况的检测
1.8 AP1S1基因在外周血中表达情况的检测
1.9 AP1S1基因全长外显子的突变检测
2结果
2.1形态学分析
2.2圆头精子标本的蛋白双向电泳图谱
2.3与圆头精子相关的蛋白质点质谱鉴定结果
2.4差异蛋白质点的RT-PCR鉴定
2.5 ADT在外周血淋巴细胞中的表达情况
2.6 AP1S1基因全长外显子的突变检测
3讨论
3.1正常精子和圆头精子的差异表达蛋白的分离与鉴定
3.3突变筛查
3.4存在的问题
附图
第三章人类精子比较蛋白质组学研究技术的应用——正常精子和死精子症患者精子差异表达蛋白的分离与鉴定
1材料和方法
1.1材料
1.2异常精子的相关检查
1.3精子蛋白质的提取和双向电泳
1.4质谱分析和数据库查询
2结果
2.1死精子症患者精液的相关检查
2.2死精子症患者精子的双向电泳图谱
2.3死精子症相关的蛋白质点质谱鉴定结果
3讨论
附 图
参考文献
附 录
小 结
综 述与精卵结合、获能及顶体反应有关的精子蛋白
附录攻读学位期间主要的研究成果
个人简历
致谢