多发性骨髓瘤致病相关基因的克隆及功能初步研究

摘要

一、定位候选克隆策略(positional candidate cloning)是传统定位克隆(positional cloning)的改进和发展,且在克隆疾病相关基因中发挥重要的作用.二、根据GenBank收录的多发性骨髓瘤细胞株(ARH-77)表达上调EST AF497797设计引物,采用半定量RT-PCR证实了多发性骨髓瘤患者及正常人骨髓细胞核该EST的表达差异.三、根据GenBank收录的多发性骨髓瘤细胞株(ARH-77)表达上调EST AF425300设计引物,运用半定量RT-PCR检测多发性骨髓瘤患者及正常人骨髓细胞中该EST的表达水平.运用MTN膜进行Northern杂交分析该EST在多种组织中的表达.进一步利用该EST作探针,筛选人胚肾cDNA文库结合

目录

文摘

英文文摘

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英文缩写注解

前 言

第一部分 多发性骨髓瘤患者13q14.3区域候选抑瘤基因的克隆

一 材料与方法

二 结果

三 讨论

第二部分 多发性骨髓瘤Alu超基因家族新成员的克隆与表达分析

一材料与方法

二 结果

三讨论

第三部分 多发性骨髓瘤细胞中MYEOV2基因的克隆及功能初步研究

一材料与方法

二结果

1 多发性骨髓瘤患者及正常人骨髓细胞AF425300的表达

2 PCR扩增cDNA文库

3 原位杂交筛选人胚肾cDNA文库

4 PCR鉴定筛选出来的阳性克隆

5 人胚肾cDNA文库筛选出来的克隆序列分析

6 通过查寻http://image.llnl.gov网上电子克隆购买

7 Northern印迹杂交分析

8 克降基因的生物信息学分析

9 MTE膜检测MYEOV2在不同组织中的表达

10 MYEOV2基因的亚克隆

11 pcDNA3.1(+)-MYEOV2 转染NIH/3T3细胞

12 筛选出来的pcDNA3.1(+)-MYEOV2细胞克隆进行一步法RT-PCR的鉴定(图3-19)

13 将MYEOV2基因ORF克隆到pEGFP-C2载体上(图3-20)

14 基因MYEOV2的细胞定位(图3-25)

15 FCAS检测MYEOV基因对NIH/3T3细胞周期、凋亡的影响

16 细胞生长曲线

三 讨论

第四部分 利用cDNA芯片技术筛查多发性骨髓瘤恶性相关基因

一 材料与方法

二 结果

三 讨论

结论

参考文献

综述一

综述二

致谢

攻读博士学位期间主要的研究成果