原代成体皮肤角质形成细胞、成纤维细胞的培养和转基因研究

摘要

目的:皮肤创伤修复的难点是修复细胞的快速增殖分化、生长因子的持续有序作用和细胞外基质支架的构建.依据现代分子生物学和组织工程学的研究进展,首先在体外克隆及构建带信号肽的人表皮生长因子基因和人血管内皮生长因子基因真核表达质粒,用脂质体转染法将人表皮生长因子基因导入原代离体成人角质形成细胞,将血管内皮细胞生长因子基因导入原代离体成人皮肤成纤维细胞,分别证实转基因细胞表达和分泌hEGF和hVEGF的能力,以达到为皮肤创伤原位修复和人工皮肤构建研究中修复细胞快速增殖、生长因子稳定有序表达目的.结论:1、成功构建了带信号肽的hEGF和hVEGF121基因的真核表达质粒;2、成人皮肤成纤维细胞和角质形成细胞在体外培养可快速稳定增殖,细胞生物学特性无明显改变;3、真核表达质粒pcDNA3.1(+)/hEGF在脂质体介导下可成功转染成人角质形成细胞,获得的转基因角质形成细胞表达分泌较高浓度具生物学活性的hEGF;4、真核表达质粒pcDNA3.1(+)/hVEGF121在脂质体介导下可成功转染成人皮肤成纤维细胞,转基因成纤维细胞能表达分泌较高浓度有生物活性的hVEGF121蛋白.5、体外培养的成人皮肤角质形成细胞具有表达分泌较低浓度hEGF功能;体外培养的成人皮肤成纤维细胞未检测到VEGF121分泌.

目录

文摘

英文文摘

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英文略缩词

前言

第一章人表皮生长因子基因真核表达质粒PCDNA3.1(+)hEGF的构建

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第二章原代成人皮肤角质形成细胞的分离、培养和转hEGFCDNA研究

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第三章人血管内皮生长因子基因真核表达质粒pcdna3.1(+)/hVEGF121)的构建

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第四章原代成人皮肤成纤维细胞的分离、培养和转hVEGF121基因研究

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

结论

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间的主要研究成果