人类细胞色素P450 2C9和EETs在高脂血症发病机制中的作用

摘要

第一部分:CYP2C9基因型在健康人和高脂血症病人中的分布;CYP2C9是一种重要的氧化酶,不仅参与临床上多种常用药物的代谢,而且参与包括雌激素在内的多种内源性物质的转化.现已知CYP2C9基因上有11种具有功能意义的单核苷酸多态性(SNP),依次被命名为CYP2C9<'*>2~<'*>12.在中国人群中,关于CYP2C9<'*>6的研究尚未开展,目前的研究中CYP2C9<'*>3是唯一常见的多态性.而近期报道的CYP2C9外显子4上Leu208Val等突变仍需进一步验证.该实验是要确定CYP2C9<'*>3、<'*>6和外显子4上Leu208Val突变在健康人和高血脂病人中的频率分布,进行CYP2C9突变与高脂血症的疾病相关性研究.运用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,我们对476名受试者进行了CYP2C9<'*>3、<'*>6和外显子4上Leu208Val突变的基因分型,包括211名高血脂病人和265名健康对照组,其中男性251人,女性225人.结果,在该人群中未发现CYP2C9<'*>6和外显子4上Leu208Val等突变;CYP2C9<'*>3在该人群中的基因频率为0.039.有趣的是,我们发现在女性高血脂病人中发生CYP2C9<'*>3突变的频率远远低于女性健康人群中的频率(x<'2>=12.377,P<0.0001,OR=0.062,95％CI:0.008~0.476),携带CYP2C9<'*>3的女性不易发生高脂血症.其机制可能是通过雌激素的作用.需要进一步的实验验证和研究CYP2C9<'*>3与高脂血症的疾病相关性存在女性特异性的机制.第二部分:高脂血症病人和健康人血浆EETs水平的比较;在CYP2C9参与转化的多种内源性物质中包括花生四烯酸(AA),使AA代谢生成环氧廿碳三烯酸(EET).体外研究发现,高浓度的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)能特异性地显著增加EETs的合成.同时体外的研究证实,环氧化物酶中CYP2C9的催化活性最强、分布最广、表达酶量最多,是一种非常重要的EET合成酶.该实验的目的是测定高血脂病人和健康人血浆中EETs及其羟化产物DHETs的浓度,比较高血脂病人与健康人之间、CYP2C9不同基因型的个体之间血浆EET浓度的差异,体内证明CYP2C9是否为EET主要的合成酶.从前一实验中筛选出35名受试者,包括7名高LDL-C(LDL-C>4.50mmol/L)的高血脂病人和10名对照者,以及9名CYP2C9<'*>3杂合子健康个体和9名CYP2C9野生型健康个体.运用高效液相色谱-质谱联用的方法测定其空腹静脉血中EETs及其羟化产物DHETs的浓度.结果仅在高血脂病人中检测到14,15-DHET的浓度,平均水平为7.79±0.70ng/mL,未检测到健康受试者EETs及DHETs的浓度.证明高血脂病人体内以14,15-DHET为主的EETs水平要高于健康对照者.但是,仍需要改进方法来进一步研究和验证EETs和CYP2C9在高脂血症疾病中的作用.

目录

文摘

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第一部分CYP2C9基因型在健康人和高脂血症人中的分布

第一章前言

第二章材料与方法

2.1试剂与仪器

2.2 CYP2C9基因分型

2.3数据统计分析

第三章实验结果

第四章分析与讨论

第五章结论

第二部分高脂血症病人和健康人血浆EETs水平的比较

第一章前言

第二章材料与方法

2.1试剂与仪器

2.2病人受试者

2.3标准溶液配制

2.4血样采集

2.5色谱测定

2.4数据统计分析

第三章实验结果

第四章分析与讨论

第五章结论

参考文献

CYP2C9和2J2在EETs合成中的作用及其生理意义

致谢