靶向EBV-LMP1 mRNA的脱氧核酶治疗LMP1阳性肿瘤的实验研究

摘要

本研究设计构建了13条靶向LMP1的脱氧核酶，并筛选出3条有效的脱氧核酶，能够抑制LMP1阳性细胞的增殖，促进细胞凋亡；体内实验表明靶向LMP1的脱氧核酶能够抑制裸鼠肿瘤的生长；将脱氧核酶与放疗联合应用时，发现靶向LMP1的脱氧核酶增强LMP1阳性鼻咽癌细胞对放疗的敏感性；其分子机制为靶向LMP1的脱氧核酶阻断LMP1的表达后抑制了被LMP1异常活化的NF-κB信号转导通路，进而调节其下游分子的p53和Survivin的活性，促进细胞越过G2/M期checkpoint，引起细胞周期时相改变，进而对放射线敏感。　　本项目利用已证实的脱氧核酶的高效特异的靶向性，首次将脱氧核酶引入EBV相关肿瘤的基因治疗的实验研究，以与多种肿瘤相关的EBV致瘤蛋白LMP1为靶标，应用脱氧核酶为手段，通过对LMP1的阻遏调控，从mRNA水平关闭LMP1基因，从而干扰信号传导途径，促进肿瘤细胞凋亡；并将脱氧核酶与放疗联合应用，从信号转导通路这个崭新的视野，研究EBV相关肿瘤细胞放疗拮抗过程中LMP1介导的NF-κB信号转导通路及其下游关键分子的作用，阐明靶向LMP1的脱氧核酶能够增强LMP1阳性肿瘤细胞对放疗的敏感性分子机制；这些创新性的发现将为EB病毒相关肿瘤的治疗提供新的理论和实验依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：资助、英文缩写注解

原创性声明和关于学位论文使用授权说明

前言

第一章设计和构建靶向EBV-LMP1mRNA的脱氧核酶

1.1前言

1.2材料与方法

1.3结果

1.3.1 LMP1 cDNA序列比较

1.3.2 LMP1 mRNA二级结构

1.3.3靶位点的选择

1.3.4脱氧核酶的设计

1.4分析与讨论

1.5结论

第二章活性脱氧核酶的筛选及其酶动力学分析

2.1前言

2.2材料与方法

2.3结果

2.3.1脱氧核酶的转染效率

2.3.2脱氧核酶在细胞内的分布

2.3.3细胞内脱氧核酶的切割活性

2.3.4细胞外分子水平检测构建的脱氧核酶的切割活性

2.4分析与讨论

2.5结论

第三章活性脱氧核酶的生物学效应

3.1前言

3.2材料与方法

3.3结果

3.3.1在B95-8细胞中确定活性脱氧核酶的生物学效应

3.3.2在CNE1-LMP1细胞中确定活性脱氧核酶的生物学效应

3.3.3活性脱氧核酶抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长

3.4分析与讨论

3.5结论

第四章脱氧核酶与放疗联合应用的生物学效应

4.1前言

4.2材料与方法

4.3结果

4.3.1活性脱氧核酶增强鼻咽癌细胞对放疗的敏感性

4.3.2脱氧核酶与放疗联合应用抑制鼻咽癌细胞增殖

4.3.3脱氧核酶与放疗联合应用抑制鼻咽癌细胞周期行进

4.3.4脱氧核酶与放疗联合应用抑制p53和Survivin的表达

4.3.5脱氧核酶与放疗联合应用对鼻咽癌裸鼠移植瘤的影响

4.4分析与讨论

4.5结论

总结论

参考文献

综述一脱氧核酶及其应用进展

综述二蛋白质组学研究在确定新的肿瘤标志物中的意义

致谢

攻读学位期间主要的研究成果