当归和当归补血汤指纹图谱及对兔血吸虫病肝纤维化的药理药效研究

摘要

中药色谱指纹图谱是中药(包括中药单味药与中药复方制剂)整体性的化学表征。指纹图谱质量控制模式的提出使得中药(材)的研究方法和质量分析手段也由针对一个或者少数几个活性成分(指标成分)的分析，发展成为对整味中药化学成分的综合分析成为可能。本论文根据当前中药色谱指纹图谱研究中的一些难点和热点问题，利用联用色谱仪器，结合能有效利用色谱和光谱/质谱信息的化学计量学方法，实现对中药及其生物样品等复杂体系的定性定量分析。论文主要涉及四个方面：当归挥发性和非挥发性化学成分的色谱指纹图谱研究；色谱指纹图谱技术用于当归化学成分在家兔体内的吸收和代谢分析；当归补血汤复方及其单味药的化学组分归属分析；当归补血汤复方及其单味药治疗家兔血吸虫病肝纤维化的药理药效研究。 一、用GC-MS和HPLC-DAD-MS色谱指纹图谱技术对当归的挥发性和非挥发性化学成分进行了定性定量分析(第二章、第三章)。并采用直观推导式演进特征投影法(HELP)对重叠组分进行分辨以获取每个组分的纯色谱和纯光谱，从而提高了组分定性和定量的准确性。用HPLC-DAD-MS联用仪器对当归的醇提化学成分进行色谱指纹图谱分析。通过解析化合物在APCI-MS和ESI-MS不同电离模式下的质谱行为，可以比较容易地找到被测物质的分子离子峰，从而确定其分子量。结合紫外光谱并与文献报道的实验数据进行对照，实现了当归中部分苯酞类物质的初步定性分析。并为当归指纹图谱数据库的建立提供丰富的信息。 二、在中药色谱指纹图谱技术的基础上，分析了当归中化学成分在家兔体内的吸收和代谢(第四章)。结合HPLC-DAD-MS联用仪器和化学计量学方法，首次提出利用色谱指纹图谱技术，通过对当归及灌胃当归前后兔血浆的色谱指纹图谱的对比分析，可同时分析筛选当归中被吸收到家兔体内的多种活性成分及血液中的代谢成分。并通过分析其进入体内活性成分的浓度消长和变化，对血液中测定的各组分的生物活性进行判断和预测。本研究提示，色谱指纹图谱技术可以用于同时分析中药中多种成分在体内的吸收代谢和药代动力学研究。 三、利用HPLC-DAD提供的二维化学数据信息，结合化学计量学方法，对统一试验条件下的当归补血汤及其单味药的色谱组分进行了比较和归属分析(第五章、第六章)。在中药各组分不完全清楚的情况下，利用联用色谱仪器和光谱相关色谱方法，可以直接判断中药复方及其单味药的不同流出色谱指纹图谱中相关物质归属，而不用对各色谱峰簇进行组分分辨和化学定性，快捷实现中药复方与单味药化学成分比较研究和追踪，对中药复方的物质组成和质量控制以及药效物质基础研究提供一种快捷的比较方法。 四、当归补血汤复方及其单味药治疗家兔血吸虫病肝纤维化的药理药效研究(第七章)。首次发现当归补血汤复方对家兔血吸虫病肝纤维化有较好的治疗效果。结合吡喹酮治疗家兔血吸虫病肝纤维化，用B超声图像评估当归、黄芪和当归补血汤治疗血吸虫病肝纤维化的效果。研究发现当归补血汤对血吸虫病肝纤维化的治疗作用优于单味药当归或黄芪。并对当归补血汤复方及其单味药的化学成分用色谱指纹图谱技术进行了分析检测。分析了当归补血汤复方与单味药的归属。初步在色谱指纹图谱基础上进行中药谱效学的尝试性探讨。

目录

文摘

英文文摘

原创性声明和关于学位论文使用授权说明

第一章引言

第二章当归挥发性化学成分的指纹图谱研究

2.1理论

2.2实验

2.2.1样品来源

2.2.2仪器与试剂

2.2.3测定条件

2.2.4挥发油提取

2.2.5数据处理

2.3结果与讨论

2.3.1生长过程中当归挥发油的指纹图谱

2.3.2当归挥发油的定性分析与色谱分辨

2.3.3当归挥发油的定量分析

2.4结论

第三章HPLC-MS指纹图谱技术分析当归非挥发性化学成分

3.1实验

3.1.1药材与供试品溶液的制备

3.1.2仪器与试剂

3.1.3测定条件

3.2结果与讨论

3.2.1当归的HPLC-DAD-MS指纹图谱分析

3.2.2化合物在不同电离模式下的离子化行为

3.2.3定性分析

3.3结论

附表

第四章HPLC-MS及化学计量学方法用于当归在家兔体内的吸收和代谢研究

4.1理论

4.2实验

4.2.1仪器与试剂

4.2.2当归药材与供试品溶液的制备

4.2.3血液样品的采集及处理

4.2.4测定条件

4.3结果与讨论

4.3.1当归和血液样品的LC-DAD-MS指纹图谱研究

4.3.2血液样品中吸收和代谢的活性成分分析

4.3.3多组分光谱相关色谱用于当归与血液样品重叠色谱峰簇的比较分析

4.3.4定性分析

4.3.5药物活性成分的相对吸收率评价

4.4结论

第五章当归补血汤复方及单味药组分的变化及归属分析(一)—藉联用色谱技术及(单)组分光谱相关色谱的分析方法

5.1理论

5.2实验

5.2.1仪器与试剂

5.2.2供试品溶液的制备

5.2.3色谱检测条件

5.3结果与讨论

5.4结论

附图

第六章当归补血汤复方及单味药组分的变化及归属分析(二)—藉联用色谱技术及多组分光谱相关色谱的分析方法

6.1理论

6.2实验

6.2.1仪器与试剂

6.2.2提取溶剂的选择

6.2.3提取溶剂的选择

6.2.4流动相的选择

6.2.5供试品溶液的制备

6.2.6色谱检测条件

6.2.7数据处理

6.3结果与讨论

6.3.1单味药与复方的分离分析

6.3.2多组分光谱相关色谱比较分析

6.4结论

第七章当归补血汤复方及单味药对兔血吸虫病肝纤维化的药理药效研究

7.1实验

7.1.1中药口服液制备

7.1.2中药口服液色谱条件

7.1.3实验动物及模型

7.1.4实验动物分组与处理

7.1.5观察指标及方法

7.2 B超声像实验结果

7.3当归补血汤、当归、黄芪的色谱指纹图谱及比较

7.4结论

参考文献

致谢

攻读学位期间主要的研究成果