端粒酶逆转录酶与口腔黏膜下纤维性变癌变关系的初步研究

摘要

研究背景:口腔黏膜下纤维性变(OSF)是一种慢性、隐匿性、具有癌变倾向的口腔黏膜病，主要病理变化包括上皮组织萎缩、黏膜固有层、黏膜下层胶原纤维堆积、变性和血管闭塞、减少，临床上常表现为口干、灼痛、进刺激性食物疼痛、进行性张口受限、吞咽困难等症状。大量研究表明：嚼槟榔是OSF主要的致病因素，全世界约有6亿槟榔咀嚼者，WHO将OSF列为癌前状态，OSF癌变率高达7.6％，成为口腔部位最重要的癌前病损之一。病例对照研究表明：吸烟、嚼槟榔习惯与OSF癌变关系密切，OSF癌变机制目前还不清楚，可能与槟榔的致癌成分槟榔碱、烟草、抑癌基因P53基因的失活、细胞因子、有关酶的改变如环氧合酶-2、赖氨酰氧化酶、端粒酶、诱导型NO合成酶等以及基因多态性、创伤、细胞免疫等关系密切，确切机制有待进一步研究。 近年来端粒酶(Telomerase)成为肿瘤研究的热点。端粒酶通过催化端粒合成，保持端粒长度而维持细胞持续分裂能力，人端粒酶是一种核糖核蛋白复合体，主要由结构RNA(hTR)成分和催化亚单位端粒酶逆转录酶(hTERT)成分组成，端粒酶活性由其重要组分hTERT决定。近期研究发现，人类大多数恶性肿瘤及永生化细胞中，端粒酶活性显著增高，端粒酶活性的激活与人类多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。研究表明，hTERT在口腔粘膜癌前病变和口腔鳞癌中均有异常表达，且在口腔粘膜轻度、中度、重度异常增生至鳞癌中呈递增表现，在鳞癌中显著高于异常增生，提示hTERT在口腔肿瘤恶变前的晚期阶段即癌变早期被活化，由于hTERT常在口腔癌变的早期表达，它可以作为口腔癌前病变的恶变危险性的生物指标，用于口腔癌的早期诊断。hTERT是否参与了OSF癌变过程，目前鲜有报道。 本研究在已有的研究基础上欲采用免疫组化SP法对OSF及癌变组织的石蜡包埋切片进行染色，检测其hTERT的蛋白表达，初步探讨hTERT在OSF癌变发生发展过程中的作用，为早期诊断癌前病变的恶化危险性提供依据。同时体外培养正常人口腔角质形成细胞(KC)，通过不同浓度槟榔碱(arecoline)及尼古丁(nicotine)干预体外培养的KC，用Western印迹法和逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)观察与OSF癌变密切相关的致癌因子槟榔碱、尼古丁对KChTERT蛋白及mRNA表达的影响，进一步探讨hTERT在OSF癌变发生发展中的作用。 第一章口腔粘膜下纤维性变及其癌变组织中端粒酶逆转录酶表达及其意义 目的:探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)在口腔粘膜下纤维性变(OSF)癌变过程中的作用。 方法 用免疫组织化学S-P法检测10例正常口腔粘膜组织，46例OSF组织，14例OSF癌变组织以及10例相邻癌旁OSF组织中hTERT表达情况。 结论:OSF癌变组织中存在hTERT阳性表达，癌变组织中hTERT阳性表达明显高于OSF组织。hTERT过度表达可能与OSF癌变发生密切相关。 第二章槟榔碱及尼古丁对口腔角质形成细胞端粒酶逆转录酶表达的影响 目的:观察槟榔碱及尼古丁对人口腔角质形成细胞(KC)端粒酶逆转录酶(1ffERT)mRNA及蛋白表达的影响，进一步探讨hTERT在OSF癌变发生发展中的作用机制。 方法:实验分为30、60、90ug／ml槟榔碱组、相应浓度槟榔碱+25ug／ml尼古丁组和空白对照组。采用Western印迹法和逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)观察与OSF癌变密切相关的致癌因子槟榔碱、尼古丁对：KC hTERT mRNA及蛋白表达的影响。 结论: 1．槟榔碱对KC hTERTmRNA与蛋白表达有明显诱导作用，且在一定范围内呈剂量依赖关系。 2．尼古丁能增加槟榔碱诱导：KC hTERT mRNA及蛋白表达，尼古丁对槟榔碱具有协同作用。 3．槟榔碱和尼古丁诱导：KC hTERT过度表达可能在OSF癌变过程中起重要作用。

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文摘

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前言

第一章口腔粘膜下纤维性变及其癌变组织中端粒酶逆转录酶表达及其意义

第二章槟榔碱及尼古丁对口腔角质形成细胞端粒酶逆转录酶表达的影响

综述

致谢

攻读学位期间主要的研究成果