脂肪间充质干细胞体外诱导及复合PLGA体内异位成软骨的实验研究

摘要

第一章脂肪间充质千细胞的分离、培养和鉴定。 目的:探讨脂肪间充质干细胞的分离、培养方法，观察其生长增殖情况，鉴定其生物性特征。 方法:以S-D大鼠为研究对象，机械分离，胶原酶消化腹股沟和附睾脂肪组织，获取细胞培养于含新生牛血清体积分数为0.1的低糖DMEM培养基中，利用干细胞的附壁生长特性，通过更换培养基而不断纯化获取脂肪间充质干细胞，镜下观察细胞形态变化。MTT法测定传3、5和10代细胞增殖情况。流式细胞仪检测传5代细胞表面CD29、CD34和CD44表达情况。 结果:原代培养后24小时看见微少贴壁细胞，初起为小圆形，48小时后可见梭形、短梭形和多角形贴壁细胞，3天后成纤维样细胞明显增多，5天左右进入对数增长期，8天左右细胞单层融合接近90％。传代细胞于2小时即可完成贴壁，生长较快，多数为成纤维样细胞，6天左右细胞单层融合。传3代后细胞形态均一。10代以后细胞则逐渐有宽大梭形样变。生长曲线显示传3、5代脂肪间充质干细胞均有较强的增殖能力，其中传5代细胞更为明显，而传10代细胞的增殖能力逐渐减弱。流式细胞仪检测传5代细胞有95％表达CD44，96％表达CD29，而只有5％表达CD34。 结论:大鼠脂肪间充质干细胞分离提取操作简便易行，且有较强的生长增殖能力，能够长期培养，符合组织工程种子细胞的基本条件。 第二章脂肪间充质干细胞体外诱导成软骨能力的实验研究。 目的:探讨脂肪间充质干细胞在特定培养基条件下体外定向软骨细胞分化的能力。 方法:(1)如前述方法，分离培养大鼠脂肪间充质干细胞。 (2)取传5代细胞采用初始细胞密度为1.0×10<'10>/L的

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论文说明：英文缩略词

声明

前言

第一章脂肪间充质干细胞的分离、培养和鉴定

1.1材料与方法

1.2结果

1.3讨论

1.4结论

附图

第二章脂肪间充质干细胞体外诱导成软骨能力的实验研究

2.1材料和方法

2.2结果

2.3讨论

2.4结论

附图

第三章脂肪间充质干细胞复合PLGA体外诱导成软骨的实验研究

3.1材料与方法

3.2结果

3.3讨论

3.4结论

附图

第四章脂肪间充质干细胞复合PLGA体内构建组织工程化软骨的实验研究

4.1材料与方法

4.2结果

4.3讨论

4.4结论

附图

参考文献

综述 软骨组织工程研究进展

致谢

攻读博士学位期间论文著作成果