益智健脑颗粒对P8系快速老化小鼠颞叶蛋白表达的影响

摘要

目的： 分析中药益智健脑颗粒(YiZhiJianNaoKeLi,YZJNKL)干预P8系快速老化小鼠(Senescence Accelerated Mouse P8，SAMP8)颞叶组织的差异蛋白质表达，从蛋白质的角度探讨中药益智健脑颗粒防治阿尔茨海默病(Alzheimers disease，AD)的作用机理。 方法： (1)采用30只6月龄SAMP8随机分为三组，一组为治疗组(n=10)，灌服益智健脑颗粒浓缩液；一组为模型组(n=10)，不予处理即处死；一组为对照组(n=10)，灌服等剂量双蒸水。 (2)8周后，应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分别分离治疗组、模型组、对照组SAMP8颞叶组织总蛋白，胶体考染显色，Image Scan对胶体考染的2-DE胶扫描以获取电子图像，PDQuest图像分析软件比较分析三组的双向凝胶电泳图谱并识别差异表达的蛋白质，应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹图谱 (peptide mass fingerprinting，PMF)，搜索数据库对鉴定部分差异表达的蛋白质点进行鉴定。 结果： (1)建立了治疗组、模型组和对照组SAMP8颞叶组织的2-DE图谱。 (2)比较分析三组SAMP8颞叶组织的2-DE图谱，发现治疗组与模型组存在37个差异蛋白点，其中有12个在治疗组表达上调，17个表达下调，5个只在治疗组表达，3个只在模型组表达；治疗组与对照组之间的差异点同上述两组基本相似；模型组与对照组无明显差异。 (3)鉴定了治疗组和对照组SAMP8颞叶组织的差异表达大于2倍的蛋白质点如10个，如肌动蛋白解聚因子-1、硫氧还原过氧化酶-6、肽基脯氨酸顺反异构酶A、二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶-1、电压依赖性阴离子通道2、浮舰蛋白1、高迁移率族蛋白B1等。根据SWISS-PROT和NCBI数据库中提供的信息，这些差异蛋白质的功能涉及抗氧化应激、信号转导、分子伴侣及细胞骨架等，与阿尔茨海默病病变密切相关。 结论： (1)益智健脑颗粒可调节SAMP8颞叶组织多种蛋白质表达，提示该方药具有多靶点的作用。 (2)益智健脑颗粒可能通过抗氧化应激、分子伴侣、调节NO、介导信号转导、维护细胞骨架等途径，以减少老年斑和神经纤维缠结的形成及保护神经元等来实现其治疗AD的作用。

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文摘

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论文说明：英文缩略词

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前言

第一章材料与方法

1.1材料

1.1.1药物

1.1.2动物分组与喂养

1.1.3主要试剂

1.1.4主要仪器

1.1.5生物信息学软件

1.1.6主要实验溶液配制

1.2实验方法

1.2.1颞叶组织标本的收集

1.2.2颞叶组织总蛋白提取

1.2.3颞叶组织总蛋白浓度测定

1.2.4双向凝胶电泳

1.2.5质谱样品制备

1.2.6 MALDI-TOF-MS质谱分析

1.2.7数据库查询

第二章结果

2.1颞叶组织总蛋白浓度测定

2.2颞叶组织蛋白表达双向凝胶电泳分析

2.3差异蛋白质点的识别

2.4差异蛋白质点的MALDI-TOF-MS肽质量指纹图分析

2.5蛋白质的功能分类及表达变化

第三章讨论

3.1 SAMP8特征

3.2中医对AD的认识

3.3益智健脑颗粒治疗AD的中医理论基础

3.4蛋白质组学与AD的关系

3.5差异蛋白质与AD的关系及益智健脑颗粒干预的影响

3.6 小结

第四章结论

参考文献

综述 蛋白质组学的进展及其在Alzheimer病中的应用

致谢

攻读学位期间的主要研究成果