人类正常精浆蛋白液化过程的二维电泳研究

摘要

研究目的： 在本所建立和优化人类精浆蛋白提取方法，建立较窄pH梯度(pH4-7)二维电泳图谱和液化各个时间点宽pH梯度(pH3-10)二维电泳图谱。利用差异蛋白质组学的方法分析精浆蛋白在液化过程中各种蛋白的变化规律，初步探讨其在精液液化和男性生殖中的作用。 材料： 随机选取13名身体健康并排除遗传病史，年龄在20-30岁之间，且精液确定已使AID病人受孕并分娩了正常的婴儿的供精者，所有供精者都签署了供精知情同意书。所有供精者在标本采集前后微生物感染检查均为阴性。 收集正常男性精浆标本，取不液化、液化10min、30min、60min以及镜下精液液化时等几个时间点的精浆蛋白。 方法： 1.比较TCA/丙酮沉淀蛋白抽提法和超滤/变性蛋白抽提法提取蛋白的优劣，选取和优化提取效率较高的蛋白抽提法提取蛋白。 2.二维电泳技术分离蛋白点并利用差异蛋白质组学方法比较不同液化时间的精浆蛋白进行差异分析。 3.比较临床检测镜下水平液化时的精浆蛋白二维电泳图谱与各时段精浆蛋白二维电泳图谱。 4.MALDI-TOF质谱鉴定所获得的发生变化的蛋白点进行生物信息学分析。 结果： 1. 比较了两种二维电泳蛋白提取方法，结果显示TCA/丙酮沉淀蛋白抽提法提取获得人类精浆蛋白效率高于超滤/变性抽提法。 2. 使用较窄范围pH胶条(pH4-7)固象梯度胶条建立了在pH4-7段的正常人类精浆蛋白图谱，获得了718个蛋白点；使用宽范围pH胶条(pH3-10)建立不同液化时间正常人类精浆蛋白二维电泳图整合后共获得739个蛋白点。 3. 利用差异蛋白质组学方法，使用ImageMaster5.0<'TM>分析软件对不同液化时间精浆蛋白二维电泳图谱进行差异分析获得了36个差异蛋白点；对比了镜下液化的精浆蛋白，与液化30分钟后的精浆蛋白在蛋白水平上无显著差异。 4. 质谱鉴定了其中23个蛋白点，获得了18种在精浆液化过程中变化的蛋白片段，其中14个蛋白片段在液化过程中降解，4个蛋白片段含量增加。 结论：本试验在建立了正常可生育男性精浆蛋白图谱的基础上，对在液化不同时间的精浆蛋白进行二维电泳分析，对人类精浆蛋白进行动态地研究，质谱鉴定获得了18个在精浆液化过程中变化的蛋白片段，其中14个蛋白片段在液化过程中降解，4个蛋白片段含量增加。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文缩写对照

原创性声明及关于学位论文使用授权说明

实验技术路线图

前言

实验材料

实验方法

实验结果

1.比较了TCA/丙酮沉淀蛋白抽提法，超滤/变性蛋白抽提法对人类精浆蛋白的提取效率。

2.使用精液化速率测定装置测定所几个时间段的精液化率

2.正常人类精浆蛋白较窄Ph梯度(pH4-7)图谱的建立和分析

4.将精浆分别不液化,液化10分钟,30分钟,60分钟,90分钟后提取蛋白,二维电泳分离蛋白点后采用Image Master TM5.0分析。

讨论

结论

参考文献

综述　人类精浆蛋白质组学研究进展

致谢