ATP-结合盒转运体在鼻咽癌紫杉醇耐药细胞中的表达

摘要

目的：通过全基因组寡核苷酸芯片筛查鼻咽癌紫杉醇耐药细胞株中的耐药相关基因，重点分析ATP-结合盒转运体基因在鼻咽癌细胞对紫杉醇产生耐药过程中的作用。 方法： 1．集落形成实验检测已建立的人鼻咽癌耐药细胞株CNE-1/Taxol的耐药指数。 2．将处理前后的鼻咽癌的CNE-1细胞株及其耐药细胞株CNE-1/Taxol实施RNA抽提，并按程序进行基因芯片实验操作。3．运用GCOS和dChip软件对鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系CNE-1/Taxol及其亲本细胞系CNE-1之间的基因表达差异进行大规模的分析。 结果： 1．将己建立的鼻咽癌耐药细胞株进行集落形成实验3次，确定其ICso值为7.98ng/ml，耐药指数为7.00±0.62。 2．利用dChip软件，经过两次筛选，找出了不仅在耐药细胞株中高表达，并且经IC<,50>紫杉醇药物处理后继续上调的8个基因。这些基因是MB(肌红蛋白)、MAOA(单胺氧化酶A)、FOLR1 (叶酸盐受体)、DNER(δ表皮生长因子相关受体)、OR2A7(气味分子受体)、CFH(补体H因子)、DERP12(真皮乳头衍生蛋白12)、KIAA0500(KIAA0500蛋白)。 3．发现了8个在耐药细胞中表达上调2倍以上的ATP-结合盒转运体基因：ABCA7(ATP-结合盒转运体A7)、ABCB10(ATP-结合盒转运体B10)、ABCC1(多药耐药相关蛋白1，MRP1)、ABCC4(多药耐药相关蛋白4，MRP4)、ABCC5(多药耐药相关蛋白5，MRP5)、ABCC6(多药耐药相关蛋白6，MRP6)、ABCD3(ATP-结合盒转运体D3)和ABCG2(乳腺癌耐药蛋白，BCRP)，这些基因在CNE-1/Taxol的表达随半数抑制剂量的紫杉醇处理后均未出现继续上调。 结论： 1．经cDNA Microarray实验，并利用dChip软件，经过两次筛选，发现了MB、MAOA、FOLR1、CFH、KIAA0500、DNER、OR2A7和DERP12在紫杉醇耐药细胞系中高表达，而且随IC<,50>紫杉醇药物处理表达继续增强，提示这些基因可能与鼻咽癌抵抗紫杉醇化疗有关。2．ATP-结合盒转运体家族成员的中上调的8个基因可能与鼻咽癌细胞的紫杉醇耐药产生有关，但可能不是关键基因。

目录

文摘

英文文摘

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前言

第一章材料与方法

1.1实验材料

1.1.1细胞株

1.1.2主要试剂与耗材

1.1.3仪器设备

1.1.4试验中所用部分培养基及试剂的配制

1.2实验方法

1.2.1细胞培养

1.2.2集落形成实验(Colony formation assay)检测人鼻咽癌耐药细胞株CNE-1/Taxol的耐药指数

1.2.3细胞的处理

1.2.4细胞总RNA的提取、定量和检测

1.2.5 Affymetrix表达谱芯片实验

1.2.6统计学处理

第二章实验结果

2.1鼻咽癌耐药细胞株的耐药指数

2.2四个样本的总RNA的定量及检测结果

2.3四个样本的cRNA的质量检测结果

2.4基因芯片实验质量控制的评估结果

2.5样品检测结果

2.6基因表达的分析

第三章讨论

3.1关于“小样本，大数据”检测结果及其价值的评估

3.2耐药相关基因

3.3ATP-结合盒转运体超家族与耐药

第四章结论

参考文献

综述 ATP结合盒转运与多药耐药

致谢

攻读学位期间主要的研究成果