非霍奇金淋巴瘤p73基因甲基化及去甲基化研究

摘要

目的：恶性淋巴瘤(ML)是严重影响人类健康进而威胁人类生命的一种血液系统恶性肿瘤。目前关于恶性淋巴瘤发病机制尚未完全明了，其治疗方法主要为联合化疗。由于化疗对骨髓及其它脏器具有严重的毒副作用，因而影响患者的生活质量并限制临床治疗效果。本实验的目的在于探讨恶性淋巴瘤的部分发病机制，尤其是抑癌基因(p73基因)CpG岛甲基化在恶性淋巴瘤发生发展中的作用及其在指导治疗中的意义。进一步研究5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶(5-aza-CdR)能否通过逆转甲基化，恢复P73基因表达而发挥抗肿瘤作用，为临床去甲基化治疗奠定基础。 方法和结果：首先用酚-氯仿方法提取非霍奇金淋巴瘤细胞的基因组DNA，经热变性法获得单链DNA后用亚硫酸氢钠(NaHSO3)硫化处理，然后采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测非霍奇金淋巴瘤p73基因CpG岛甲基化状态，琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。P73基因CpG岛甲基化者可见到一条67bP的PCR产物，而非甲基化者则可见到一条72bP的PCR产物。22例非霍奇金淋巴瘤患者MSP检测结果：P73基因CPG岛甲基化率为27.2％。出现甲基化阳性条带的样本，大多数同时伴有非甲基化条带。高度恶性比低度恶性更易发生甲基化，其发生率分别为42.8％和0％。统计学显示有显著性差异。 为了研究CdR是否具有逆转淋巴瘤细胞P73基因CpG岛高甲基化的作用，使用反转录PCR(RT-PCR)的方法检测CdR药物作用前后P73基因mRNA的表达情况。首先用Tri201提取总RNA，然后经反转录合成cDNA，进一步以cDNA为模板，设计跨越p73基因两个外显子的引物进行35个循环的PCR扩增。P73基因有表达者可见到一条390bp的扩增产物。对CdR作用前后淋巴瘤细胞p73基因mRNA的表达情况显示：淋巴瘤细胞的P73基因CpG岛为高甲基化状态，电泳结果未检测到390bp的p73基因mRNA扩增条带；淋巴瘤细胞经CdR作用后电泳显示一条390bp的阳性扩增条带。 结论：通过以上实验证明在非霍奇金淋巴瘤中p73基因确有较高频率的CPG岛异常甲基化。RT-PCR结果显示CdR具有明确的去甲基化作用，能够使P73基因重新恢复表达，为非霍奇金淋巴瘤去甲基化临床治疗提供实验依据。

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文摘

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论文说明：英文缩略语

声明

引言

第一章材料和方法

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3结果判定:

1.4统计学处理

第二章结果

2.1一般临床资料

2.2淋巴瘤组织P73基因的甲基化

2.3 P73基因的去甲基化

第三章讨论

3.1恶性淋巴瘤的相关基因研究的意义

3.2 DNA甲基化及其异常表现

3.3 DNA甲基化的改变和基因失活及肿瘤的关系

3.4 P73基因失活与恶性血液病的关系

3.5 DNA甲基化的检测

3.6 DNA甲基化与临床治疗策略

3.7 p73去甲基化

第四章结论

参考文献

综述P73基因与DNA甲基化

致谢

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