腺苷2A受体、血管活性肠肽在偏头痛模型大鼠脑干及三叉神经节的表达变化

摘要

偏头痛是一种常见的发作性神经血管功能紊乱性疾病，已成为严重影响患者工作和生活的慢性病之一。其病因及发病机制目前尚无定论，致使药物治疗靶点各异。 腺苷2A受体(adenosine 2A receptor，A2AR)属G蛋白偶联受体家族，可以与不同的G蛋白和蛋白激酶偶联，产生生物学效应。在中枢神经系统中，腺苷在其受体介导下调节着运动、神经元保护、睡眠、觉醒、疼痛、药物成瘾、脑卒中、神经退行性疾病等及其他重要的病理生理过程。 血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)是一种脑肠肽，属于胰高血糖素/促胰液素族，广泛分布于中枢及外周神经系统中，具有调节平滑肌张力及神经内分泌功能、神经元保护等多种重要的生物学功能。 Sebastiao和Cunha等发现A2AR的激活可增强VIP对GABA释放的作用和降钙素基因相关肽(calciltonin gene-telated peptide，CGRP)在突触传递的作用。Hohoff等分析了265例MA/Mo(migrainewith aura/migraine without aura)患者A2AR基因6个标记的单体型在MA_病人的频率，证实A2AR基因变异与MA的发病机制有关。Ledent等发现A2AR基因敲除鼠出现痛觉减退。A2AR、VIP两者共同与偏头痛的关系目前仍不清楚，国内外未见报道。 氟桂利嗪是长效非选择性的钙通道阻滞剂。国内外研究证实氟桂利嗪不但能有效地减少头痛的发作频率，减轻头痛的严重程度，且副作用较轻，是一种安全有效的偏头痛预防性治疗药物。 本研究将建立硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠模型，并利用氟桂利嗪进行干预，检测脑干及三叉神经节组织中A2AR mRNA及蛋白的表达和VIPmRNA及组织含量，比较上述各物质在发作期与间歇期的表达变化，以探讨A2AR、VIP与大鼠偏头痛的关系。 方法: 1.动物分组及处理：以清洁级Sprague-Dawley (SD)大鼠为实验对象，模型组：依Tassorelli法皮下注射硝酸甘油注射剂10mg/kg，每周1次，共5周，制作实验性偏头痛模型，并于第2次造模后给予生理盐水10ml/kg/d灌胃，共4周；生理盐水对照组(简称对照组)：与模型组同步对照，以生理盐水注射代替硝酸甘油注射；药物干预组(简称干预组)：注射硝酸甘油制作实验性偏头痛模型，自第2次造模后给予氟桂利嗪5mg/kg/d灌胃，共4周。 2.取材：发作期组和间歇期组分别于第5周造模后3h或4d，断头处死大鼠后取脑干及三叉神经节组织。液氮内保存。 3.RT-PCR法半定量检测大鼠脑干及三叉神经节组织A2AR、VIPmRNA的表达量。 4.Western-Blot法检测大鼠脑干及三叉神经节组织A2AR蛋白的表达量。 5.放射免疫法测定大鼠脑干及三叉神经节组织VIP含量。 结果: 1.模型组和干预组大鼠脑干及三叉神经节组织的A2AR mRNA和蛋白表达水平在偏头痛发作期均明显高于对照组(P<0.05)，而在偏头痛间歇期，表达无明显变化(P>0.05)。 2.模型组及干预组大鼠脑干及三叉神经节组织的VIP含量在偏头痛发作期明显高于对照组(P<0.05)，而在偏头痛间歇期，表达均无明显变化(P>0.05)：VlPmRNA表达水平在偏头痛发作期和间歇期无明显变化(F>0.05)。 结论: 1.A2ARmRNA及蛋白和VIP组织含量表达上调可能与大鼠偏头痛发作有关。 2.氟桂利嗪可以减轻偏头痛的发作，但与A2AR、VlP表达量的改变无关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

第一章前言

第二章实验材料

2.1主要试剂

2.2主要仪器与设备

第三章实验方法

3.1研究对象

3.2实验动物分组

3.3硝酸甘油实验性偏头痛大鼠模型制作、评估及取材

3.4RT-PCR检测脑干及三叉神经节组织内A2AR和VIPmRNA的表达

3.5 Western-Blot检测组织A2AR蛋白的表达

3.6放射免疫法测定组织VIP含量

3.7统计学分析

第四章结果

4.1大鼠行为学变化及模型评价

4.2总RNA样品质量检测

4.3各组A2ARmRNA的表达及比较

4.4各组A2AR蛋白表达及比较

4.5各组VIPmRNA表达及比较

4.6各组VIP组织含量及比较

第五章讨论

第六章结论

参考文献

综述　腺苷2A受体与神经系统疾病

致谢