肿节风化学成分、生物活性及质量控制研究

摘要

肿节风(又名草珊瑚、九节茶、接骨木)为金粟兰科草珊瑚属植物草珊瑚的干燥全株，分布于我国长江流域以南各省。肿节风味苦、辛，性平，具清热凉血、活血消斑、祛风通络等功效，临床用于治疗恶性肿瘤、感染性疾病、口腔疾病、跌打损伤等症。 自由基参与机体多种疾病的发生和发展过程，如细胞的老化、癌症的发生及动脉硬化、血栓的形成等。清除自由基、提高机体抗氧化能力，是许多药物防治疾病的重要途径。本课题采用DPPH自由基清除率法首次测定了肿节风中水提部位的抗氧化活性，研究表明水提取的强极性部位具有很强的抗氧化活性(IC50=13.49μg/mL)，是肿节风抗氧化作用的活性部位。 为阐明肿节风抗氧化活性部位的物质基础，本课题采用聚酰胺、Sephadex LH-20、Pre-HPLC等多种色谱方法对该部位的化学成分进行了分离纯化。共分离得到24个化合物，其中7个黄酮、10个咖啡酸衍生物、6个简单有机酸、1个香豆素类化合物。根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定了其中23个化合物结构，分别为：山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸(1)，槲皮素-3-O-α-D-葡萄糖醛酸(2)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(3)，5，7，4'-三羟基-8-C-β-D-葡萄糖二氢黄酮碳苷(4)，(2S，3S)-花旗松素-3-O-鼠李糖苷(5)，朝藿定C(6)，槲皮素-3-O-鼠李糖苷(7)，4-0-咖啡酰基.奎宁酸甲酯(8)，3-O-咖啡酰基.奎宁酸甲酯(9)，5-O-咖啡酰基.奎宁酸甲酯(10)，3-O-咖啡酰基.奎宁酸(11)，4-O-咖啡酰基.奎宁酸(12)，迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖(13)，迷迭香酸甲酯(14)，迷迭香酸(15)，咖啡酸(16)，丹参素甲甲酯(17)，3,4-二羟基苯甲酸(18)，3-甲氧基-4-羟基苯甲酸(19)，异秦皮啶(20)，邻苯二甲酸二丁酯(21)，对羟基苯甲酸(22)，丁香酸(23)。其中化合物1～17，19，21，23为首次从该属植物中分离得到。 采用DPPH自由基清除率法测定了各化合物的抗氧化活性，结果表明各咖啡酸衍生物、丹参素衍生物，具有邻二酚羟基的黄酮类化合物等均能有效清除DPPH自由基(IC50=9.64～30.64 μM)，且清除能力与槲皮素和芦丁相当，是有效的天然自由基清除剂，是肿节风抗氧化活性部位的物质基础。 采用高效液相色谱法建立了肿节风抗氧化活性部位质量控制的方法，通过与对照化合物比较(保留时间和紫外吸收图谱)标定了HPLC图谱上的14个色谱峰，表明肿节风抗氧化活性部位的主要成份有三种类型：咖啡酸衍生物、黄酮类和香豆素类。 分析了八个不同省份的肿节风药材的HPLC色谱图，表明各省份药材的成分组成基本相同，但是总多酚的含量及各单体成分的含量差异较大。 本研究发现咖啡酸衍生物和黄酮类化合物是肿节风抗氧化作用的重要物质基础，现有的关于肿节风及其制剂质量控制的方法多为测定其中香豆素类成分(异秦皮啶)的含量，不能全面反映肿节风的质量。本课题建立了HPLC法同时检测肿节风抗氧化活性部位的咖啡酸衍生物、黄酮类化合物和香豆素类化合物，能更有效地从整体上控制肿节风药材的质量。

目录

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声明

第一章草珊瑚属化学成分、生物活性及质量控制研究综述

1.1化学成分

1.1.1倍半萜类成分

1.1.2黄酮类

1.1.3三萜皂苷类

1.1.4香豆素类

1.1.5其他类

1.2药理作用

1.2.1抗肿瘤作用

1.2.2抗菌消炎作用

1.2.3抗病毒作用

1.2.4免疫调节作用

1.2.5抗胃溃疡作用

1.2.6促进骨折愈合作用

1.2.7其他作用

1.3毒理作用研究

1.4质量控制研究

1.4.1含量测定

1.4.2指纹图谱

1.5结语

第二章结构鉴定

2.1黄酮类化合物

2.1.1化合物1的结构鉴定

2.1.2化合物2的结构鉴定

2.1.3化合物3的结构鉴定

2.1.4化合物4的结构鉴定

2.1.5化合物5的结构鉴定

2.1.6化合物6的结构鉴定

2.1.7化合物7的结构鉴定

2.2咖啡酸衍生物

2.2.1化合物8的结构鉴定

2.2.2化合物9的结构鉴定

2.2.3化合物10的结构鉴定

2.2.4化合物11的结构鉴定

2.2.5化合物12的结构鉴定

2.2.6化合物13的结构鉴定

2.2.5化合物14的结构鉴定

2.2.8化合物15的结构鉴定

2.2.9化合物16的结构鉴定

2.3其他类化合物

2.3.1化合物17的结构鉴定

2.3.2化合物18的结构鉴定

2.3.3化合物19的结构鉴定

2.3.4化合物20的结构鉴定

2.3.5化合物21的结构鉴定

2.3.6化合物22的结构鉴定

2.3.7化合物23的结构鉴定

第三章肿节风化学成分的提取与分离

3.1仪器与试剂

3.2提取与分离

3.2.1提取分离过程

3.2.2提取分离示意图

第四章抗氧化活性研究

4.1材料

4.1.1仪器

4.1.2试剂

4.1.3供试品

4.2实验方法

4.2.1实验原理

4.2.2数据处理

4.3 DPPH自由基清除率的测定

4.4结果与讨论

4.4.1肿节风提取物DPPH自由基清的除能力

4.4.2各化合物对DPPH自由基的清除能力

4.4.3小结与讨论

第五章药材质量控制研究

5.1仪器与试剂

5.2实验方法

5.2.1供试品溶液的制备

5.2.2对照化合物溶液的配置

5.2.3色谱条件的优化

5.2.4方法学考察

5.2.5样品测定

5.3实验结果与讨论

第六章结果与讨论

参考文献

附录

附录1肿节风化学成分波谱图（一）

附录1肿节风化学成分波谱图（二）

附录1肿节风化学成分波谱图（三）

附录1肿节风化学成分波谱图（四）

附录2肿节风质量控制研究HPLC方法学考察图谱

附录3不同产地药材的HPLC图谱

附录4对照化合物的紫外吸收图谱

致谢

攻读学位期间的主要研究成果