吲哚美辛对COPD模型大鼠骨骼肌细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响

摘要

目的：通过制备慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型，用吲哚美辛对COPD模型大鼠进行干预，观察膈肌、趾长伸肌的Bcl-2、Bax蛋白表达及其骨骼肌细胞的凋亡率，探讨吲哚美辛对COPD模型大鼠骨骼肌细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响。 方法：100只健康Wistar大鼠随机分为模型组80只，正常对照组20只。模型组采用1～14天，16～60天熏香烟，第15天气管内注入猪胰蛋白酶（PEE）的方法建立COPD大鼠模型。正常对照组不熏香烟，在模型组气管内注入PEE的同一天采用相同术式气管内注入等量生理盐水。继续饲养8天，以低于正常对照组大鼠平均体重的90％作为判断发生营养不良的标准，将模型组大鼠分为：COPD营养正常组和COPD营养不良组。COPD营养不良组按随机化原则分为COPD营养不良生理盐水组、吲哚美辛1组、吲哚美辛2组、吲哚美辛3组，总计6个小组。正常对照组、COPD营养正常组和COPD营养不良生理盐水组灌胃生理盐水，吲哚美辛1组给予吲哚美辛0.5mg/kg、吲哚美辛2组给予吲哚美辛1.0mg/kg、吲哚美辛3组给予吲哚美辛2.0mg/kg进行灌胃干预，共给药14天，继续饲养14天后取大鼠膈肌、趾长伸肌制备石蜡切片，分别采用TUNEL法测定膈肌、趾长伸肌石蜡切片细胞凋亡率和免疫组织化学法测定Bcl-2、Bax蛋白表达，ImageJ图像系统测定免疫组化蛋白表达强度，所得数据经SPSS13.0软件进行完全随机设计的方差分析、t检验及直线相关性分析。 结果：1.吲哚美辛2组膈肌细胞、趾长伸肌细胞凋亡率低于COPD营养不良生理盐水组、吲哚美辛1组、吲哚美辛3组（P<0.05），高于正常对照组和COPD营养正常组大鼠（P<0.05）。同组内比较膈肌细胞凋亡率高于趾长伸肌细胞凋亡率，但无统计学意义（P>0.05）。 2.吲哚美辛2组膈肌和趾长伸肌Bcl-2蛋白表达高于COPD营养不良生理盐水组、吲哚美辛1组、吲哚美辛3组（P<0.05）。同组内比较膈肌和趾长伸肌Bcl-2蛋白表达无统计学差异（p>0.05）。 3.吲哚美辛2组膈肌、趾长伸肌Bax的蛋白表达均弱于吲哚美辛1组（P<0.05）、吲哚美辛3组（P<0.05）。同组内比较大鼠膈肌和趾长伸肌Bax的蛋白表达均无统计学意义（P>0.05）。 结论： 1.细胞凋亡可能是COPD模型大鼠骨骼肌萎缩的重要机制。Bcl-2、Bax参与调节COPD模型大鼠骨骼肌凋亡。 2.不同剂量的吲哚美辛对COPD营养不良模型大鼠干预，结果提示吲哚美辛1.0mg/kg剂量可改善COPD营养不良模型骨大鼠的骨骼肌细胞的凋亡。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：本文主要英汉缩略语名词对照表

声明

实验流程图

前言

第一章材料和方法

1.1试验动物及分组

1.1.1试验动物

1.1.2试验动物分组

1.1.3试验动物编号

1.1.4试验动物饲养

1.2主要试剂

1.3主要仪器

1.4主要试验用溶液的配制

1.4.1猪胰蛋白酶生理盐水溶液

1.4.2 4%多聚甲醛

1.5大鼠COPD模型建立

1.5.1气管内注入猪胰弹性蛋白酶

1.5.2被动吸烟方法

1.6评判COPD大鼠模型

1.7 COPD模型组大鼠营养不良的判断

1.8模型组成模后再分组及用吲哚美辛干预

1.9处死动物的时间、方式、肺功能的测定及标本的处理

1.9.1处死动物的时间

1.9.2肺功能的测定

1.9.3处死动物的方式

1.9.4肌肉组织的处理

1.9.5肺组织的处理

1.10骨骼肌、肺组织石蜡切片的制作

1.10.1骨骼肌石蜡切片的制作

1.10.2肺组织石蜡切片的制作

1.11骨骼肌组织病理学观察

1.12骨骼肌细胞细胞凋亡率的测定

1.12.1方法

1.12.2结果观察和计算

1.13 Bcl-2蛋白表达检测

1.14 Bax蛋白表达检测

1.15 Bcl-2、Bax观察和分析

1.16统计学分析

第二章结果

2.1模型评价

2.1.1大鼠一般情况

2.1.2大鼠肺组织、气道病理改变

2.1.3肺功能

2.1.4大鼠体重变化

2.2大鼠膈肌、趾长伸肌重量测定结果

2.3骨骼肌病理变化

2.4骨骼肌细胞凋亡率测定

2.4.1实验大鼠膈肌、趾长伸肌细胞凋亡率

2.4.2膈肌细胞凋亡率与大鼠体重相关性分析

2.4.3膈肌细胞凋亡率与膈肌重量的相关性分析

2.4.4趾长伸肌细胞凋亡率与大鼠体重相关性分析

2.4.5趾长伸肌细胞凋亡率与趾长伸肌重量的相关性分析

2.5 Bcl-2、Bax表达

2.5.1 Bcl-2表达

2.5.2 Bax的表达

2.5.3趾长伸肌细胞凋亡率与趾长伸肌Bcl-2、Bax相关性分析

2.5.4膈肌细胞凋亡率与膈肌Bcl-2、Bax相关性分析

附图

第三章讨论

第四章结论

参考文献

综述：细胞凋亡与慢性阻塞性肺疾病

致谢