川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型巨噬细胞移动抑制因子、核因子Kappa-B及抑制性卡巴蛋白-a表达的影响

摘要

目的：利用改良Allens打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型，观察损伤段脊髓组织中巨噬细胞移动抑制因子、核因子-Kappa B及抑制性卡巴蛋白-α的表达及川芎嗪干预对损伤段脊髓组织中MIF、NF-KB及I-KBα表达的影响。进一步探讨川芎嗪对急性脊髓损伤的保护作用及可能机制。 材料和方法：正常成年SD大鼠110只，随机分成三组：（1）假手术组（S组，n=10）；（2）对照组（C组，n=50）；（3）实验组（T组，n=50）实验组和对照组大鼠按术后动物存活的时间再各分为1小时组，3小时组，6小时组，12小时组、1天组、3天组、5天组、7天组、14天组和21天组，共10个亚组，每亚组5只大鼠。采用改良Allens重物打击法制作脊髓T10水平损伤模型100个。实验组（T组）大鼠伤后30分钟后开始予川芎嗪注射液经腹腔内注射200mg/kg，每天给药一次，存活时间少于5天者用药至死，多于5天者用药5天。对照组（C组）大鼠给予等量的生理盐水经腹腔内注射，给药次数和实验组相同。在相应时间点分别处死对应大鼠获取脊髓标本。在每个脊髓标本损伤中心横行切片，分别作MIF、NF-KB及I一KBα的免疫组化染色，观察各自的表达情况并计数，各组动物的脊髓标本不同时间点MIF、NF-KB及I-KBα的表达进行统计学分析。此外，1天及超过1天处死的大鼠在处死前作改良Rivlin斜板实验、CBS评分和BBB评分，以此评测脊髓运动神经功能。利用SPSS13.0统计分析软件进行两独立样本的t检验。 结果：术后1小时脊髓前角MIF表达阳性细胞计数开始升高，对照组和实验组均在术后12小时达到高峰；术后12小时、1天、3天、5天和7天5个时间点上，MIF表达数对照组较实验组表达高，差异有统计学意义（P<0.05），其中术后5天和7天两个时间点差异具有显著统计学意义（P<0.01）。 术后1小时脊髓前角NF-K B表达阳性细胞计数即显著升高，对照组和实验组均在术后12小时即达高峰；术后1天、3天、5天和7天4个时间点上，实验组NF-K B表达数低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），其中术后5天和7天两个时间点差异具有显著统计学意义（P<0.01）。 I-KBα刚好与NF-KB表达相反，术后1小时脊髓前角I-KBα表达阳性细胞计数即显著下降，对照组和实验组均在术后12小时即达最低值；术后1天、3天、5天和7天4个时间点上，实验组I-KBα表达数高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），其中术后5天和7天两个时间点差异具有显著统计学意义（P<0.01）。 改良Rivlin斜板实验，术后斜板临界角度数均值随时间点延长逐渐升高，实验组较对照组斜板临界角度数高，术后7天、14天和21天时，两组间斜板临界角度数差异有统计学意义（P<0.05），其中术后14天和21天两个时间点差异具有显著统计学意义（P<0.01）。 BB评分，术后BBB评分均值随时间点延长逐渐升高，实验组较对照组评分值高，术后5天、7天、14天和21天时，实验组和对照组差异有统计学意义（P<0.05），其中术后14天和21天两个时间点差异具有显著统计学意义（P<0.01）。 CBS评分，术后CBS评分均值随时间点延长逐渐降低，实验组较对照组评分值低，术后5天、7天、14天和21天时，实验组和对照组差异有统计学意义（P<0.05），其中术后7天、14天和21天三个时间点差异具有显著统计学意义（P<0.01）。 结论：①川芎嗪对大鼠急性继发性损伤的脊髓有保护和促进其功能恢复的作用，这种作用在损伤后1周至2周最为显著；②川芎嗪能够促进大鼠急性继发性损伤后脊髓组织中I-KBα的表达，抑制MIF及NF-KB的表达。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

第二章材料与方法

2.1主要设备和试剂

2.2大鼠分组和饲养

2.3大鼠急性脊髓损伤模型的制作

2.4大鼠的给药

2.5脊髓运动功能的行为学评分

2.6大鼠脊髓标本的获取

2.7大鼠脊髓组织蜡块切片

2.8 HE染色

2.9 ABC(亲和素-生物素酶复合物)染色法检测MIF、NF-KB和I-KBα(按试剂盒生产商提供的试验操作流程和标准进行)

2.10统计学分析

第三章结果

3.1行为学评分

3.2一般组织形态学检测结果(HE染色)

3.3 MIF、NF-KB和I-KBα的表达

第四章讨论

4.1急性脊髓损伤模型

4.2 SD大鼠的给药

4.3行为学评分

4.4 MIF、NF-KB、I-KBα和脊髓损伤

4.5川芎嗪与脊髓损伤

第五章结论

参考文献

综述川芎嗪促进脊髓损伤修复的研究展进

致谢

攻读学位期间主要的研究成果