核因子-κB对偏头痛患者血清培养正常人单核细胞株表达细胞因子TNF-α、IL-17的影响

摘要

偏头痛是临床上常见的非器质性头痛，目前其发病机制仍不十分清楚。在诸多学说中，脑干-三叉神经-血管炎性学说越来越受到广泛关注，认为偏头痛的主要病理改变是脑膜血管扩张和炎症反应，包括许多炎性细胞因子的异常都与其有关，如白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10等及白三烯、肿瘤坏死因子（TNF）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、C反应蛋白和抗心磷脂抗体等。 有研究表明，IL-17可激活诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）高表达，使细胞产生NO、IL-1、TNF及MCP-1，而NO、TNF及IL-1与偏头痛的发生发展关系密切。因此，推测IL-17可能参与了偏头痛的发生发展。而IL-17是否与偏头痛有关呢？目前尚未见报道。 作为在炎性反应中起关键作用的快反应转录因子NF-kappaB（Nuclearfactor-kappaB，NF-κB），在偏头痛发作过程中的作用在硝酸甘油诱导的偏头痛动物实验中已得到了证明，而在偏头痛患者发生发展过程中的作用及与细胞因子TNF-α，IL-17之间的关系如何目前国内外尚无报道。 目的: 本研究拟在体外细胞培养基础上，研究偏头痛患者血清培养细胞后，细胞上清液中所产生的细胞因子TNF-α、IL-17的含量，以及应用NF-κB抑制剂BAY11-7082后TNF-α、IL-17的含量变化，以进一步探讨TNF-α、IL-17、NF-κB在偏头痛的发生发展中的关系，为临床治疗偏头痛提供理论依据。 方法: 选取符合国际诊断标准的偏头痛患者40例，及正常对照组40例，采取单侧颈静脉血，不抗凝，低温离心后取上层血清，置于-70℃冰箱保存待测。 采用人单核细胞株THP-1替代人外周血单核细胞进行实验。THP-1采用10％胎牛血清、RPMI1640培养基（含青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml）进行培养，置细胞于37℃的CO2孵育箱内，通以95％O2和5％CO2混合气体。使细胞密度维持在5×106～1×107/ml。用0.4％苔盼蓝拒染试验检测细胞活率，证实99％以上为活细胞。当细胞总数达到实验所需数量时，换用无血清RPMI1640维持液培养24h，使细胞同步化。将THP-1随机分成偏头痛血清组、偏头痛血清+NF-κB抑制剂BAY11-7082组及正常血清对照组。各组应用48孔培养板中的40孔，调整细胞浓度为1×107/ml/孔。培养24h后，分别收集细胞上清液，离心分装后采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定上清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-17（IL-17）的含量。以标准品的OD值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制出标准曲线，通过标准曲线，将各组测定的TNF-α及IL-17的OD值换算出相应浓度，并进行Pearson相关性分析。 结果: （1）偏头痛组血清培养THP-124h后，细胞上清液中TNF-α、IL-17含量均较正常血清对照组升高，差异具有统计学意义（P均<0.05）。 （2）偏头痛血清+BAY11-7082培养的THP-1细胞上清液中TNF-α含量显著低于偏头痛血清组，差异有统计学意义（P<0.05），而和正常血清组相比差异无统计学意义。 （3）偏头痛血清+BAY11-7082培养的THP-1细胞上清液中IL-17含量低于偏头痛血清组，但差异无统计学意义（P>0.05），而仍高于正常血清组，差异具有统计学意义（P<0.05）。 （4）相关性分析显示：偏头痛血清组中TNF-α与IL-17呈正相关（r=0.906，P<0.01）；偏头痛血清+NF-κB抑制剂BAY11-7082组中TNF-α与IL-17呈正相关（r=0.871，P<0.01）；正常血清对照组中TNF-α与IL-17呈正相关（r=0.885，P<0.01）。 结论: 偏头痛患者发作期可能存在NF-κB导致的炎性细胞因子TNF-α、IL-17的分泌增加。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词表

声明

前言

第一章 材料与方法

1.1实验材料

1.2研究对象

1.3方法

1.4 ELISA法检测THP-1培养上清液中TNF-α、IL-17的含量

1.5统计学分析

第二章 结果

2.1各组一般资料可比性分析

2.2THP-1生长的形态学观察

2.3THP-1细胞上清液中细胞因子THP-α、IL-17水平的测定

2.4THP-1细胞上清液TNF-α、IL.17水平Pearson线性相关性分析

第三章 讨论

3.1实验细胞的选择

3.2颈静脉血的选择

3.3 NF-kB抑制剂BAY11-7082的选择

3.4偏头痛与NF-kB及细胞因子TNF-α、IL-17

第四章 结论

参考文献

综述 NF-kappaB在偏头痛发病机制中的研究进展

致谢

攻读学位期间发表文章情况

附：头痛问卷