肺癌患者血浆中四个肿瘤相关基因启动子过甲基化的检测及意义

摘要

目的：肺癌作为一种恶性肿瘤，其发病率和死亡率近年来一直呈上升趋势，已成为我国恶性肿瘤病人死亡的首要原因。而且绝大多数肺癌病人临床确诊时已到中晚期。因此，早期发现、早期诊断、早期治疗是提高肺癌疗效的关键。DNA甲基化是一种不改变DNA序列，具有可逆性，但是能改变基因转录调控的表观遗传学机制，也是导致抑癌基因或肿瘤相关基因失活的重要原因。研究证实肺癌中存在多种肿瘤相关基因启动子的甲基化，且这些基因的甲基化与肺癌的发生、发展相关。最近有研究报道，在肺癌组织中WIF-1、RASSF1A、BLU及CDH13四个肿瘤相关基因启动子CpG岛异常甲基化可导致这些基因低表达或表达缺失，且这种低表达或表达缺失与肺癌的发生发展关系密切。近年来，在肿瘤患者的血浆/血清DNA中已发现肿瘤相关基因的启动子的异常甲基化，如胃癌、肝癌、头颈部肿瘤等。本课题检测肺癌患者血浆中WIF-1、RASSF1A、BLU、CDH13基因启动子区的甲基化状态，探讨WIF-1，RASSF1A、BLU、CDH13基因启动子的过甲基化在肺癌筛查及早期诊断中的意义。 方法：实验组：58例肺癌患者血浆；对照组：20位健康志愿者血浆。应用巢式甲基化特异性PCR法检测肺癌患者外周血血浆中WIF-1、RASSF1A、BLU及CDH13启动子甲基化的状态，并分析其甲基化状态与肺癌患者临床病理资料的关系。 结果：肺癌患者血浆中WIF-1、RASSF1A、BLU及CDH13基因的启动子区甲基化阳性率分别为34.48％（20/58）、37.93％（22/58）、29.31％（17/58）、31.03％（18/58）；而20例正常人血浆用nMSP法均未检测到上述基因启动子的过甲基化。两组比较差异有统计学意义，P值分别为0.002、0.001、0.006、0.005。在所检测的全部病人中，至少一个基因启动子发生甲基化的几率为77.59％。结合肺癌患者的临床资料分析发现，上述四个基因甲基化率与患者的年龄、性别、分期及组织学分型等均无关，但WIF-1基因异常甲基化的阳性率与肺癌患者的吸烟史有关，吸烟的肺癌患者血浆中检测到WIF-1异常甲基化的概率为48.38％（15/31），比无吸烟史的肺癌患者18.52％（5/27）明显增高。 结论：肺癌患者血浆中WIF-1、RASSF1A、BLU及CDH13基因启动子甲基化阳性率明显升高，其中WIF-1基因启动子的甲基化与吸烟有关，联合检测血浆中上述四个基因启动子的甲基化有助于肺癌患者的早期诊断及高危人群筛查。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略表

声明

第一章前言

第二章材料与方法

2.1材料

2.1.1标本来源

2.1.2主要试剂

2.1.3主要仪器

2.2方法

2.2.1外周淋巴细胞DNA提取

2.2.2血浆的分离及保存

2.2.3血浆中游离DNA的提取

2.2.4健康志愿者全血基因组DNA甲基化酶处理(甲基化阳性对照)

2.2.5 DNA的修饰与纯化

2.2.6巢式MSP法扩增

2.2.7对照设置

2.2.8判断标准

2.2.9统计学处理

第三章实验结果

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述 Ras相关区域家族1A基因异常甲基化在肺癌中的研究进展

致谢

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