小檗碱对Epstein-barr病毒DNA复制的抑制作用

摘要

背景与目的： EB病毒（Epstein-barr virus，EBV）的感染与鼻咽癌的发生发展有着密切的关系，EB病毒相关抗体和EBV-DNA的检测已作为鼻咽癌早期诊断、疗效评价的一个指标。小檗碱（Berberine，BBR）或含BBR的中药复方在鼻咽癌防治中起重要作用。本文通过分析BBR处理后Raji细胞中EBV-DNA的变化量，探讨BBR对EBV-DNA复制的抑制作用。 方法： 选取带EB病毒的Raji细胞作为研究材料，运用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法分析BBR对Raji细胞生长的影响，选用BBR的细胞无毒性浓度（non-cytotoxic concentration，NCC）处理Raji细胞，同时测定培养基中LDH的含量，进一步确证BBR的NCC；采用巢式荧光定量PCR方法，在Mx3000p型检测仪上定量检测EBV-DNA的含量，分析BBR对EBV-DNA复制的影响。 结果： 1.MTT结果显示，BBR在10～100μol/l对Raji细胞增殖生长有明显的抑制作用（P<0.05），而在0～10μmol/l对Raji细胞生长增殖无明显影响（P>0.05），因此0～10μmol/l为BBR对Raji的细胞无毒性浓度（NCC）。 2.LDH结果表明，BBR在0～10μmol/l时处理Raji细胞，细胞培养基中LDH含量与空白对照组无明显差异。0～10μmol/l确为BBR细胞无毒性浓度范围（NCC），下部实验采用该浓度进行实验。 3.巢式荧光定量PCR分析EBV-DNA拷贝数结果表明，当BBR的浓度为40μmol/l、10μmol/l、1.25μmol/l时处理Raji细胞，细胞中EBV-DNA拷贝数显著降低（P<0.05）。 结论： 1.MTT结果和LDH检测结果均提示，0～10μmol/l为BBR的对Raji细胞的细胞无毒性浓度。 2.BBR可以抑制Raji细胞中EVB-DNA的复制。 3.BBR在0～10μmol/l范围对Raji细胞生长分裂和细胞生理活动无明显影响，在此浓度下BBR仍可以抑制Raji细胞中EBV-DNA的复制，这可能是BBR确切的药理学作用而非毒性作用。这为使用BBR或者含BBR的中药复方来防治鼻咽癌的提供了新的实验依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写及中英文对照表

声明

第一章前言

第二章材料与方法

2.1主要实验材料

2.1.1细胞株

2.1.2药物

2.1.3主要试剂

2.1.4 PCR引物和探针

2.1.5主要仪器设备

2.1.6试剂配制

2.2实验方法

2.2.1实验技术路线

2.2.2细胞培养

2.2.3 MTT法

2.2.4 LDH的测定

2.2.5细胞EBV-DNA的抽提

2.3统计学处理

第三章结果

3.1MTT结果

3.2药物对细胞形态的影响

3.3 LDH测定结果

3.4巢式荧光定量PCR检测结果

3.4.1标准曲线的建立

3.4.2 Raji细胞中EBV-DNA的表达

第四章讨论

4.1 EBV-DNA检测方法的建立

4.2 EBV-DNA在鼻咽癌诊断和治疗中的动态变化

4.3小檗碱的抗肿瘤作用

第五章结论

参考文献

综述 蛋白质与蛋白质相互作用的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间参加的科研项目和发表的论文