P-gp及CYP3A诱导剂地塞米松解除中枢抑制药物阿米替林中毒的机制研究

摘要

一、目的 从上调mdr1基因诱导血脑屏障上P-gp的外向转运和上调CYP3A基因诱导肝药酶以加速体循环代谢两个途径研究中枢抑制药物阿米替林中毒的解毒机制。 在体内考察预先给予不同剂量及时长的地塞米松后对大鼠阿米替林代谢动力学的影响和脑-血药物浓度比值；并测定大鼠脑组织及肝中CYP3A2和P-gp编码基因的表达水平，以探讨其影响机制。 二、方法 1.给药及采样 1.1选用清洁级健康成年雄性wistar大鼠（250-300g）40只，按完全随机分组设计，分为八组，每组5只。分别连续腹腔注射玉米油4天（Ka组）、地塞米松玉米油溶液（1mg·kg-1）2天（2La组）、地塞米松玉米油溶液（1mg·kg-1）4天（4La组）、地塞米松玉米油溶液（5mg·kg-1）2天（2Ma组）、地塞米松玉米油溶液（5mg·kg-1）4天（4Ma组）、地塞米松玉米油溶液（25mg·kg-1）2天（2Ha组）、地塞米松玉米油溶液（25mg·kg-1）4天（4Ha组）和维拉帕米生理盐水溶液（8 mg·kg-1）注射阿米替林1小时前（Ⅰ组），每只于静脉注射阿米替林后5，10，30，60，120，200，300和400 min眼眶后静脉丛取血。采血完毕后将各组大鼠处死，快速取肝脏组织和大脑组织，置液氮中保存。 1.2选用清洁级健康成年雄性wistar大鼠40只按完全随机分组设计，每组4只，分为十组。Kb、2Lb、4Lb、2Mb、4Mb、2Hb、4Hb组前处理方法分别与Ka、2La、4La、2Ma、4Ma、2Ha、4Ha相同；4LI组、4MI组和4HI组为4Lb、4Mb、4Hb组大鼠阿米替林给药前1小时腹腔注射维拉帕米生理盐酸溶液（8mg·kg-1）。每只于静脉注射阿米替林1h后，断头处死。收集血液和脑组织。 2.生物样品测定方法 2.1采用HPLC-MS测定血浆和1.2中取出的脑组织中阿米替林及其活性代谢物去甲替林的浓度。 2.2采用RT-PCR测1.1脑和肝组织中mdrla及CYP3A2表达水平。 三、结果 1.生物样本中药物浓度的测定结果 用HPLC-MS法测定阿米替林及其活性代谢物NOR的浓度。在血浆中，AMI和NOR分别在10～3200ng.mL-1和10～1000ng·mL-1浓度范围内线性良好。在脑组织匀浆液中AMI，NOR分别在25～2000ng·mL-1和1.5～100ng·mL-1浓度范围内线性良好。方法回收率均在89％～114％范围内，日间和日内精密度均<12％。 2.大鼠静脉注射阿米替林药代动力学及脑/血浆药物浓度比 2.1各地塞米松处理组的AMI曲线下面积（AUC0→∞）、平均滞留时间（MRT）和清除率（CLtot）均低于空白组；但维拉帕米抑制剂组大鼠的AMI药动学参数与空白组相比，无显著性差异。 2.2各地塞米松给药组与空白组大鼠的NOR曲线下面积（AUC0→∞）和峰浓度（Cmax）无显著性差异，但抑制剂组大鼠的此二者参数均大于地塞米松给药组和空白组。 2.3各地塞米松给药组大鼠的脑/血AMI和NOR浓度比值均低于空白组。但在验证组（LI，MI，H）中给予P-gp抑制剂维拉帕米后仍未能逆转AMI和NOR在大鼠脑部的减少，分别与4Lb，4Mb，4Hb组比较无显著性差异。 3.各组大鼠脑和肝组织中mdrla及CYP3A2的表达水平 3.1随着地塞米松给药剂量的加大和用药时间的延长，大鼠肝组织中mdrla和CYP3A2的表达水平升高，且各地塞米松处理组的表达量明显高于空白对照组。 3.2相比空白组，各地塞米松组大鼠脑组织中mdrla的表达水平无明显改变。 四、结论 1.长时间大剂量给予地塞米松可诱导大鼠肝组织中mdrla和CYP3A2的表达，并加速AMI的代谢和消除，其中以肝药酶诱导占主要因素。代谢物NOR在体内的消除受P-gp影响较大，因去甲替林为AMI的主要活性代谢物，其活性与母药相似，故P-gp的诱导对于AMI体内消除，解除其大剂量时的中毒亦具有重要意义。 2.试验发现地塞米松可降低大鼠脑部AMI和NOR的浓度分布，从而减少毒（药）物在中枢部位的蓄积。但是给予P-gp抑制剂维拉帕米未能逆转药物分布减少的趋势，且未观察到mdrla基因表达的变化，故有待进一步考证地塞米松降低AMI及NOR中枢浓度的作用机制。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：本文所用英文缩写词表

声明

前言

第一部分HPLC-MS法同时测定大鼠血浆和脑中阿米替林与去甲替林的浓度

1仪器与材料

1.1仪器

1.2试剂与药品

1.3溶液的配制

2方法

2.1色谱条件

2.2质谱条件

2.3样本处理

3结果

3.1色谱-质谱行为

3.2方法学考察

4讨论与结论

附图、表

第二部分地塞米松对大鼠体内阿米替林消除动力学和血脑分布的影响

1材料与方法

1.1实验动物和饲养环境

1.2实验动物分组

1.3仪器及试剂

2试验设计

2.1动物试验

2.2大鼠血浆、脑组织中阿米替林和去甲替林浓度的测定

2.3统计学处理

3结果

3.1血药浓度-时间曲线及药动学参数

3.2脑/血中药物浓度的比值

4讨论与结论

第三部分地塞米松对大鼠脑和肝组织mdrla及肝CYP3A2mRNA表达水平的影响

1仪器与材料

1.1仪器及试剂

1.2实验标本

2试验方法

2.1引物设计

2.2组织总RNA的提取

2.3半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)

2.4 PCR产物检测及结果分析

3结果

3.1地塞米松对大鼠肝中mdrla mRNA表达量的影响

3.2地塞米松对大鼠肝中mdrla mRNA表达量的影响

3.3地塞米松对大鼠肝中CYP3A2 mRNA表达量的影响

4讨论与结论

全文小结

参考文献

综述 P-糖蛋白介导的中枢神经系统药物相互作用

致谢

攻读学位期间的研究情况