IL-27、IL-17及IL-10在EAN中的表达及IL-27干预对其表达的影响

摘要

目的:吉兰，巴雷综合征是一种常见的累及周围神经系统的自身免疫性疾病，其主要病理特征为周围神经的髓鞘脱失和炎性细胞浸润，其病因和发病机制尚不十分清楚。实验性自身免疫性神经炎（EAN）是研究GBS的理想模型。研究发现促炎性细胞因子介导的炎症反应在自身免疫性疾病的发病过程中起了很重要的作用。IL-27是2002年新发现的一种细胞因子，研究发现IL-27对致病性Th1、Th17细胞均具有广泛的免疫抑制作用，可抑制其产生促炎性细胞因子，此外，IL-27还可以促进抗炎性细胞因子IL-10的产生，可以缓解许多实验性自身免疫性疾病的症状。本实验运用逆转录聚合酶连反应（RT-PCR）观察IL-27P28、IL-27EBI3、IL-17、IL-10mRNA在实验性自身免疫性神经炎（EAN）模型组及IL-27干预组Lewis大鼠外周血、脾脏、淋巴结、坐骨神经中的动态表达变化，初步探讨IL-27对EAN的干预效果及IL-27、IL-17、IL-10在EAN发病机制中可能起到的作用，为临床寻找新的治疗吉兰-巴雷综合症及其他自身免疫性疾病的策略奠定理论基础。 方法:104只Lewis大鼠，清洁级，雄性，6-8周，体重160-180克，随机分为模型组EAN组（n=6，6，6，6）；完全弗氏佐剂对照组CFA组（n=6，6，6，6）； IL-27干预组EAN+IL-27组（n=6，6，6，6）；生理盐水干预对照组EAN+NS组（n=4，4，4，4）；生理盐水对照组NS组（n=4，4，4，4）。EAN组、EAN+IL-27组、EAN+NS组大鼠用周围神经髓鞘蛋白P258-73aa和完全弗氏佐剂免疫，CFA组只注射完全弗氏佐剂作为致病组的对照。IL-27干预组在免疫接种后第5于双腋下及双腹股沟处皮下注射IL-27，生理盐水干预对照组在免疫接种后第5于双腋下及双腹股沟处皮下注射生理盐水。观察实验动物的发病情况并按评分标准做EAN严重性的临床评估并观察IL-27对EAN病程的影响。分别在第7天，第16天，第24天，第33天处死动物，取大鼠的坐骨神经根制作病理切片，行HE染色和Weil氏髓鞘染色观察其病理改变。断颈处死后取得的外周血、脾、淋巴结、坐骨神经经相关处理后冻存，用RT-PCR技术检测各组大鼠体内IL-27P28、IL-27EBI3、IL-17、IL-10 mRNA的动态表达。 结果: EAN大鼠在免疫后6-8天发病，16-18天时症状达高峰，24-33天好转，EAN及生理盐水干预对照组大鼠体重明显减轻或不增；IL-27干预组大鼠体重先下降或不增后呈缓慢增长；生理盐水对照组和佐剂对照组大鼠体重呈增长趋势。IL-27P28mRNA的表达表现为持续增高，在发病的恢复早期达到最高（与对照组相比均有统计学意义，P<0.01）。EBI3、IL-17 mRNA的表达有着相似的动态变化，在发病初即可见表达升高（与对照组相比均有统计学意义，P<0.01）；发病高峰时表达达高峰，（与对照组相比均有统计学意义，P<0.01）。IL-10 mRNA在发病初及发病高峰期始终表达较低，在恢复早期达高峰（与对照组相比均有统计学意义，P<0.01）。EAN+IL-27组大鼠症状较EAN组及EAN+NS对照组大鼠轻，其坐骨神经中炎性细胞浸润也较EAN+NS组减少，脱髓鞘程度较轻。EAN+IL-27组IL-17在发病各期均低于EAN组及EAN+NS组，有显著性差异（P<0.01），IL-27P28、IL-27EBI3及IL-10在发病各期均高于EAN组及EAN+NS组（P<0.01）。 结论:①IL-27能够有效抑制Lewis大鼠EAN病情的进展②IL-17的分泌可能与EAN的发病有关，IL-10可能抑制EAN的发病③IL-27可能通过抑制IL-17的分泌，促进IL-10的分泌而抑制EAN大鼠体内的炎症反应

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词简表

声明

第一章 前言

第二章 材料与方法

2.1主要试剂与药品

2.2主要仪器及耗材

2.3实验动物的准备与分组

2.4建立EAN模型和干预流程

2.5模型评价

2.6逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)

2.7分析及统计方法

第三章 结果

3.1实验动物的发病情况、临床评分

3.2实验动物坐骨神经的病理观察

3.3 RT-PCR结果

第四章 讨论

1.IL-10mRNA、IL-27mRNA与EAN

2.IL-17mRNA、IL-27mRNA与EAN

3.IL-27mRNA与EAN

第五章 结论

参考文献

综述 IL-27的生物学功能研究进展

致谢