褪黑素在大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的脑保护作用实验研究

摘要

目的：研究褪黑素在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的脑保护作用。 材料与方法：采用枕大池注血法制备蛛网膜下腔出血模型，选用健康成年SD大鼠120只随机分成A、B、C、D4组，根据设计时间点不同每组分5亚组，每个亚组6只。A组为假手术对照组，仅进行相关血管游离后缝合切口，分别再饲养1h、6h、12h、24h及72h；B组为SAH+NS对照组，B1、B6、B12、B24及B72亚组分别为SAH+NS模型制作成功后再饲养1h、6h、12h、24h及72h；C组为SAH组，C1、C6、C12、C24及C72亚组分别为SAH模型制作成功后再饲养1h、6h、12h、24h及72h；D组为SAH+MT组， D1、D6、D12、D24及D72亚组分别SAH+MT模型制作成功后再饲养1h、6h、12h、24h及72h。A组、B组、C组和D组均在饲养时间完成后即断头取脑。在视交叉后1mm及4mm处冠状切面取切片行H-E染色、Bax和Bcl-2免疫组化染色，分别观察海马区神经元的存活情况及Bax和Bcl-2的表达，采用SPSS13.0软件对实验数据进行进行统计学分析。 结果：H-E染色切片于光镜下见A组基底动脉管壁平滑无增厚，结构完整，B、C组血管直径变小，内皮细胞变性、肿胀明显，D组血管轻微收缩，内皮细胞轻微肿胀。H-E染色切片于光镜下计数海马CA1区存活神经元密度， A组偶见神经元凋亡；B组和C组可见大量锥体细胞凋亡。D组海马CA1区神经细胞凋亡程度较B、C组同时间点轻。免疫组化染色切片观察见：Bcl-2和bax阳性细胞主要为胞质着色，棕黄色，均匀弥漫染色。（1）Bcl-2免疫阳性细胞观察结果如下：在A组，bcl-2阳性细胞在海马神经元中有很微弱的表达，B、C、D组海马CA1区bcl-2表达明显，D组与B、C组相比，阳性细胞数多且较强。（2）bax免疫阳性细胞观察结果如下：在假手术A组，bax阳性细胞在海马神经元中有很微弱的表达，B、C、D组海马CA1区bax表达明显。B、C组与D组相比，阳性细胞数多且较强。经过统计学处理分析后，各组之间两两对比显示神经元存活数目及Bcl-2和bax表达强度存在显著性差异。 结论： 1、单纯切口损伤和NS对血管内皮细胞及脑组织中Bcl-2、Bax的表达无明显影响。 2、SAH可使脑组织中Bcl-2、Bax的表达升高。 3、褪黑激素（MT）可能通过促进了SAH大鼠抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达，抑制了促凋亡基因Bax蛋白的表达，从而抑制细胞凋亡来发挥脑神经组织及脑血管保护作用。 4、褪黑激素（MT）对SAH后CVS有扩血管的作用，但其机制不清，有待进一步研究探讨。

目录

文摘

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论文说明：常用英文缩写词

声明

前言

第一章 材料与方法

1.1试剂及仪器

1.2 大体步骤

1.3 实验分组及动物模型制备

1.4褪黑素及其它药物用法

1.5脑组织的获取及切片制作

1.6脑基底池的大体观察

1.7 HE染色步骤

1.8免疫组化操作步骤

1.9 H-E切片观察

1.10免疫组化结果观察

1.11试验动物及标本的筛选

1.12统计学处理

第二章 结果

2.1脑基底池大体观察

2.2 HE染色结果

2.3免疫组化染色观察结果

2.4 实验结果分析

第三章讨论

3.1 动物模型的制作

3.2实验动物的筛选

3.3 SAH后CVS

3.4 SAH后CVSBcl-2、Bax蛋白的表达及与细胞凋亡的关系

3.5 褪黑激素(MT)对SAH后CVS神经元凋亡的影响

3.6 褪黑素(MT)对 SAH 后 CVS Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

第四章结论

参考文献

附图

综述·一 蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的机制和治疗现状

综述·二 褪黑素的脑保护作用研究进展

致 谢