骨关节炎关节软骨细胞Fas基因异常甲基化及蛋白表达的实验研究

摘要

目的:通过对骨关节炎患者关节软骨细胞Fas基因增强子区甲基化状态及Fas蛋白表达的检测,探讨Fas基因增强子区甲基化异常在骨关节炎(OA)发生、发展中的作用。
　　方法:采用亚硫酸氢钠(Sodium-Bisulfite)方法处理基因组DNA,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测Fas基因增强子甲基化情况。免疫组化方法检测Fas蛋白表达。实验分为两组:14例对照组和35例OA患者组。采用SPSS16.0统计分析软件进行分析,行χ2检验或Fisher’s确切概率法检验和Spearman等级相关分析。
　　结果:1.OA患者与健康人软骨细胞Fas增强子区甲基化状态比较OA患者组与健康人对照组软骨细胞Fas增强子区低甲基化百分率分别为74.29％(26/35)和128.57%(4/14),经χ2检验,两组间差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　2.OA患者与健康人软骨细胞Fas蛋白表达比较OA患者组与健康人对照组软骨细胞Fas蛋白阳性率分别为77.14%(27/35)和14.29%(2/14),经χ2检验,两组间差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　3.Fas基因甲基化及蛋白表达与性别,年龄的关系Fas基因低甲基化及蛋白表达与性别,年龄无明显相关性(P＞0.05)。
　　4.OA患者软骨细胞Fas基因增强子区甲基化与蛋白表达相关分析26例Fas增强子低甲基化的OA患者中,有24例蛋白表达阳性;而27例Fas蛋白表达阳性的OA患者中,有24例Fas增强子呈低甲基化,经Spearman等级相关分析,Fas增强子低甲基化与蛋白表达呈显著正相关。(r=0.614,P＜0.01)。
　　结论:1.骨关节炎患者关节软骨细胞Fas蛋白表达水平高于正常人。
　　2.骨关节炎患者关节软骨细胞Fas基因增强子区发生了异常甲基化,Fas基因增强子区异常甲基化是Fas蛋白表达增加的重要原因,可能参与了骨关节炎的发生发展。

目录

中文摘要

英文摘要

主要英文缩略词表

前言

第一章 材料与方法

1.1 主要仪器

1.2 药品及试剂

1.3 实验分组

1.4 实验方法

1.5 统计学分析

第二章 结果

1. DNA完整性检测

2. OA患者与健康人软骨细胞Fas增强子区甲基化状态比较

3. OA患者与健康人软骨细胞Fas蛋白表达比较

4. Fas基因甲基化及蛋白表达与性别，年龄的关系

5. OA患者软骨细胞Fas增强子区低甲基化与蛋白表达相关分析

第三章 讨论

3.1 骨关节炎关节软骨细胞Fas蛋白的表达

3.2 Fas基因甲基化在OA中的作用

第四章 结论

参考文献

综述

致谢