Nampt基因多态性对2型糖尿病患者瑞格列奈疗效的影响及其机制研究

摘要

目的：烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamidephosphoribosyltransferase，Nampt)能够调节胰岛β细胞分泌胰岛素的过程，在糖尿病的发生发展中可能发挥重要的直接或间接作用。本课题旨在分析Nampt基因-948G>T和-3186C>T突变在中国湖南地区汉族T2DM人群中的分布频率及其与T2DM发生的关系；探讨这些突变对瑞格列奈治疗T2DM的疗效的影响；在细胞水平研究Nampt对胰岛素分泌的调节作用及其对与胰岛素分泌相关的重要转录因子PDX-1、FoxO1基因表达的影响。
　　 方法：采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)对154名2型糖尿病患者和142名健康对照者进行Nampt-948G>T基因型分析，对170名2型糖尿病患者和129名健康对照者进行Nampt-3186C>T基因型分析，随机选择部分样品应用直接测序法验证PCR-RFLP结果；选取-3186C>T不同基因型的40名糖尿病患者进行OATP1B1521T>C基因分型；选择35名OATPlB1521TT基因型相同的个体，每天口服3mg瑞格列奈，持续8周，服药前和服药后第8周末收集血标本5ml;采用酶氧化法测定血糖、放射免疫法测定胰岛素、高效液相色谱法测定HbAlc等反映疗效的指标。用大鼠胰岛素ELISA试剂盒检测RIN-m5f细胞胰岛素分泌水平。用Real-timePCR的方法检测RIN-m5f细胞PDX-1和FoxO1的mRNA表达水平。用western-blotting的方法检测RIN-m5f细胞PDX-1蛋白表达水平。
　　 结果：Nampt基因-948位点在糖尿病患者和健康对照中均未检测到突变。Nampt-3186C>T各基因型及等位基因频率在中国汉族T2DM患者和健康对照人群中的分布差异无统计学意义(P=0.763，P=-0.987)。瑞格列奈治疗后CT基因型患者PINS的升高值明显低于CC基因型与TT基因型(P=0.022)，CT基因型患者CHO的改变与CC基因型及TT基因型比较差异也有统计学意义(P=0.033)。用瑞格列奈10nM+NMN100μM处理RIN-m5f细胞48h，与空白对照及DMSO对照组相比，胰岛素分泌量均显著增高(P=0.023，P=0.029)，与NMN50μM组比较胰岛素分泌量的增高也有统计学意义(P=0.049)。lOμM，50μM和100μM的NMN作用RIN-m5f细胞36h，PDX-1的mRNA表达量均上调(P值分别为0.049，0.006，0.000)，lOOμM剂量组与10μM和50μM剂量组比较差异也有统计学意义（P值均为0.000)。50μM，100μM和200μM的NMN作用RIN-m5f细胞36h或48h，PDX-1的蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义。
　　 结论：Nampt基因-948G>T和-3186C>T的基因多态性与中国2型糖尿病发病无明显相关性，但-3186C>T对瑞格列奈的疗效存在一定的影响。NMN可以调控RIN-m5f细胞中胰岛素的分泌及PDX-1的mRNA表达水平。