HBx对DNA甲基转移酶3A/3B表达影响的研究

摘要

目的：将乙肝病毒X基因（HBV X）导入人源性永生化非瘤性肝细胞株QSG7701细胞，观察稳定转染后QSG7701细胞中DNMT3A/3B的表达情况。
　　 方法：①本研究室前期构建好的重组表达质粒pcDNA-X及空载体pcDNA3.0分别转染QSG7701细胞，经含G418的选择性培基筛选获得稳定转染HBV-X基因的细胞克隆（pcDNA-X/QSG7701）及稳定转染空载体pcDNA3.0的细胞克隆（pcDNA3.0/QSG7701）。RT-PCR，Westem blot分别检测转染细胞中HBX mRNA和HBx蛋白的表达。②Real time-PCR检测pcDNA-X/QSG7701细胞、pcDNA3.0/QSG7701细胞、QSG7701细胞中DNMT3A/3B mRNA的表达差异。③免疫细胞化学方法检测pcDNA-X/QSG7701细胞、pcDNA3.0/QSG7701细胞、QSG7701细胞中DNMT3A/3B蛋白的表达差异。
　　 结果：①RT-PCR，Western blot检测显示重组表达质粒pcDNA-X转染的QSG7701细胞（pcDNA-X/QSG7701）中有HBV XmRNA及HBx蛋白的稳定表达。②Real time-PCR检测显示：pcDNA-X/QSG7701与pcDNA3.0/QSG7701、未转染的QSG7701细胞相比，DNMT3A/3BmRNA表达均显著升高。（P＜0.05）③免疫细胞化学方法检测显示：pcDNA-X/QSG7701与pcDNA3.0/QSG7701、未转染的QSG7701细胞相比，DNMT3A/3B蛋白的表达均显著升高（P＜0.05）。
　　 结论：采用人源性永生化非瘤性肝细胞QSG7701为研究对象，建立了HBV-X稳定转染的细胞系pcDNA-X/QSG7701，为进一步探讨HBx在HCC的发生发展过程中所起的作用，提供了一个有价值的细胞模型。HBV-X稳定转染的人源性永生化非瘤性肝细胞QSG7701（pcDNA-X/QSG7701）中DNMT3A/3B mRNA和蛋白的表达均明显升高，提示HBV-X基因在mRNA及蛋白水平能上调转染细胞中DNMT3A/3B的表达，而细胞中DNMT3A/3B表达的增加是否能进一步影响癌基因、抑癌基因的表达水平，从而导致细胞癌变，有待进一步研究。

目录

文摘

英文文摘

英汉缩略词对照表

第一章 前言

第二章 材料和方法

2.1 材料

2.2 主要试剂

2.3 主要实验仪器

2.4 引物

2.5 实验方法

第三章 实验结果

3.1 转染细胞中HBX mRNA的表达

3.2 Western Blot检测转染细胞中HBx蛋白的表达

3.3 Real Hme-PCR检测pcDNA-X/QSG7701细胞,pcDNA3.0/QSG7701细胞和 QSG7701细胞中DNMT3A mRNA表达情况

3.4 Real Time-PCR检测pcDNA-X/QSG7701细胞,pcDNA3.0/QSG7701细胞和QSG7701细胞中DNMT3B mRNA表达情况

3.5 免疫细胞化学方法检测pcDNA-X/QSG7701细胞,pcDNA3.0/QSG7701细胞和QSG7701中DNMT3A蛋白表达情况

3.6 免疫细胞化学方法检测pcDNA-X/QSG7701细胞,pcDNA3.0/QSG7701细胞和QSG7701细胞中DNMT3B蛋白表达情况

第四章 讨论

结论

参考文献

综述:DNA甲基转移酶3A/3B与乙肝相关性肝细胞癌

致谢

攻读硕士学位期间主要的研究成果及发表的论文