OA患者关节软骨细胞Caspase-8基因启动子区非甲基化水平与蛋白表达的相关性研究

摘要

目的：
　　 通过对骨性关节炎(OA)患者关节软骨细胞半胱氨酸-天冬氨酸-特异性蛋白酶8(Caspase-8)基因启动子区非甲基化状态及Caspase-8蛋白表达的检测，探讨Caspase-8基因启动子区低甲基化在OA发生、发展中的作用。
　　 方法：
　　 采用亚硫酸氢钠(Sodium-Bisulfite)方法处理基因组DNA，甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR，MSP)方法检测Caspase-8基因启动子区非甲基化情况，免疫组化方法检测Caspase-8蛋白表达。实验分为两组：对照组14例和OA患者组35例，均为中南大学湘雅二医院住院病人。
　　 采用SPSS17.0统计分析软件进行分析，行X↗↗2↖↖检验或Fisher’s确切概率法检验和Spearman等级相关分析。
　　 结果：
　　 1．OA患者与健康人软骨细胞Caspase-8启动子区非甲基化状态比较
　　 OA患者组与健康人对照组软骨细胞Caspase-8启动子区非甲基化阳性率分别为71.4％(25/35)和35.7％(5/14)，经X↗↗2↖↖检验，两组间差异有统计学意义(X↗↗2↖↖=5.373，P=0.020)。
　　 2．OA患者与健康人软骨细胞Caspase-8蛋白表达比较
　　 14例健康人对照组软骨细胞Caspase-8蛋白有1例表达，而35例OA患者软骨细胞有13例Caspase-8蛋白表达，经X↗↗2↖↖检验，OA患者组软骨细胞Caspase-8蛋白与健康人对照组比较，差异有显著性意义(X↗↗2↖↖=4.410，P=0.036)。
　　 3．OA患者软骨细胞Caspase-8基因启动子区非甲基化水平与蛋白表达相关分析
　　 25例Caspase-8基因启动子区非甲基化阳性的OA患者中，有12例蛋白表达阳性；而13例Caspase-8蛋白表达阳性的OA患者中，有12例Caspase-8基因启动子区非甲基化阳性，经Spearman等级相关分析，Caspase-8基因启动子区非甲基化水平与蛋白表达呈显著正相关(r↘↘s↙↙=0.355,P=0.036)。
　　 结论：
　　 OA患者和健康人对照组的关节软骨细胞Caspase-8基因启动子区均发生了去甲基化，而OA患者关节软骨细胞Caspase-8基因启动子区非甲基化水平明显高于健康人对照组。提示caspase-8基因的低甲基化状态促使Caspase-8蛋白表达水平上调，可能参与了OA的发生发展。