高效液相色谱-荧光法同时测定重性抑郁障碍患者血清酪氨酸、5羟色胺和色胺酸

摘要

目的：⑴建立一种简单、快速并能同时测定血清中酪氨酸(Tyr)、5-羟色胺(5-HT)和色氨酸(Trp)的高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)。⑵探讨血清酪氨酸(Tyr)、5-羟色N(5-HT)和色氨酸(Trp)含量测定在重性抑郁障碍(MDD)患者中的临床价值。
　　 方法：①血清标本与等量5％(V/V)高氯酸溶液混合处理去蛋白后离心取上清液20μL直接进样分析。用Atlantis C18 column(4.6×150mm，i.d.5μm)分离；流动相为0.1mol/L KH2PO4：甲醇(85:15，V/V)；流速1.0mL/min；荧光检测波长：0-4min激发光波长228nm，发射光波长为306nm；4-7.5min激发光波长278nm，发射光波长为338nm；7.5min后激发光波长285nm，发射光波长为353nm。室温下12min内完成分析测定。Tyr、5-HT和Trp均采用峰保留值比较法和叠加法进行定性分析，用外标法测定峰面积进行定量分析。通过对线性范围和检测限、精密度、回收率和干扰试验的考察，对该方法进行方法学评价。②测定健康成人(n=110例)和MDD患者(n=60例)血清Tyr、5-HT和Trp含量。探讨MDD患者血清Tyr、5-HT和Trp含量含量变化临床意义。
　　 结果：⑴血清和标准品样本的Tyr、5-HT和Trp峰均分离良好，保留时间分别约为3min、5min和9min。Tyr的线性范围为0.55-275μmol/L，最低检出浓度为0.014μmol/L，回收率为98.0％-103.3％；5-HT的线性范围为0.094-47.03μmol/L，最低检出浓度为0.024μmol/L，回收率为96.3％-103.1％；Trp的线性范围为0.049-49μmol/L，最低检测浓度为0.0049μmol/L，回收率为93.3％-103.5％。Tyr、5-HT和Trp的日内、日间测定的相对标准偏差均小于5％。苯丙氨酸(Phe)、犬尿喹啉酸(Kyna)、犬尿氨酸(Kyn)和肌酐(Cre)等物质对该法均无干扰。⑵110例健康成人血清Tyr含量为(63.68±2.23)μmol/L，血清5-HT含量为(1.15±0.04)μmol/L，血清Trp含量为(42.46±1.17)±μmol/L，5-HT/Trp(×10-5)比值为(26.20±7.21)。与正常对照组比较，MDD患者组血清Tyr、5-HT和Trp含量显著降低(P<0.01)。Tyr诊断MDD的敏感性和特异性分别为：85.0％和100.0％；5-HT/Trp比值诊断MDD的敏感性和特异性分均为100％。
　　 结论：①本文在国内外首次建立HPLC-FLD法同时测定血清Try、5-HT和Trp，方法简单、快速、灵敏、特异、准确，适宜于临床和科研工作。②血清Tyr、5-HT和Try对MDD的临床辅助诊断有一定的临床价值。