鼻咽癌CNE-l及CNE-l/taxol裸鼠移植瘤模型的建立及生物学特性差异的研究

摘要

目的:
　　 1.建立人鼻咽癌CNE-1及CNE-1/taxol裸鼠皮下移植瘤模型,并研究其生物学特性;
　　 2.研究CNE-1及CNE-1/taxol裸鼠皮下移植瘤对紫杉醇及顺铂的敏感性,在体内证明顺铂能否逆转鼻咽癌紫杉醇耐药;
　　 3.探讨Bcl-2,VEGF,TSP1基因在鼻咽癌紫杉醇耐药及顺铂逆转鼻咽癌紫杉醇耐药的分子机制中的作用。
　　 方法:
　　 1.细胞培养:人鼻咽癌细胞系CNE-1及其耐药细胞亚系CNE-1/taxol培养于含14％小牛血清培养基,培养条件为37℃,5％C02,饱和湿度孵箱,用含0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA的完全消化液消化传代。
　　 2.建立人鼻咽癌CNE-1及CNE-1/taxol裸鼠皮下移植瘤模型及分组:将上述人鼻咽癌细胞株制备成浓度约1×107/ml的细胞悬液,分别种植于4只6-8周龄裸鼠腋窝皮下。待肿瘤长至直径约8mm时(共需45天,成瘤率约50％),将其取下,剪成直径为1-2mm瘤块,分别种植于24只6-8周龄裸鼠左、右侧腹皮下(左侧接种CNE-1移植瘤,右侧接种CNE-1/taxol移植瘤),待肿瘤长至直径约5mm(共需14天,成瘤率100％),随机分成3组进行药物治疗:①空白对照组:无菌生理盐水;②紫杉醇组:紫杉醇10mg/kg;⑨顺铂组:顺铂5mg/kg,均为腹腔注射(0.2ml/只/次,5次/每周)。
　　 3.实验指标观察及标本采集、处理:注射药物后,每天观察移植瘤及裸鼠生存状态,隔天测量裸鼠重量,用游标卡尺测量移植瘤的最长径(a)和最短径(b),计算移植瘤的体积(V,V=1/2ab2),绘制皮下移植瘤生长曲线,计算各组移植瘤生长倍数及给药组移植瘤生长抑制率。
　　 4.停药2天后处死裸鼠并切除皮下移植瘤,10％甲醛固定,免疫组织化学法检测各组移植瘤组织Bcl-2,VEGF,TSP1的表达情况。
　　 5.统计学处理:SPSS for windows17.0统计软件包进行数据处理,数据以均数±标准差(M±SD)表示,统计学方法采用两样本t检验,先对数据进行方差齐性分析,若方差相等采用方差相等的两样本t检验,若方差不等,采用方差不等情形的两样本t'检验,P＜0.05认为差异有显著性。
　　 结果:
　　 1.细胞悬液接种法种植人鼻咽癌CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤成瘤潜伏期长,约30天,长至直径约8mm共需45天,且成瘤率不高,约50％;新鲜组织块接种法几乎无潜伏期,长至直径约5mm共需14天,且成瘤率高,达100％。
　　 2.CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤经生理盐水处理后,生长1周,其生长倍数分别为(2.53±0.31),(1.79±0.27),两者相比差异有统计学意义,提示CNE-1/taxol移植瘤生长速率慢于CNE-1移植瘤。
　　 3.CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤经紫杉醇处理后,生长1周,其移植瘤生长抑制率分别为(67.14±13.03)％,(35.84±35.3)％,两者相比,差异有统计学意义(P＜0.05),提示CNE-1/taxol移植瘤对紫杉醇耐药。
　　 4.CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤经顺铂处理后,生长1周,其移植瘤生长抑制率分别为(44.71±14.80)％,(50.73±11.38)％,紫杉醇耐药细胞CNE-1/taxol移植瘤对顺铂更加敏感,但两者比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 5.免疫组化检测显示:
　　 ①Bcl-2:对照组CNE-1移植瘤Bcl-2的表达高于CNE-1/taxol;经紫杉醇处理后CNE-1移植瘤表达降低,CNE-1/taxol无明显变化;经顺铂处理后CNE-1移植瘤表达无明显变化,CNE-1/taxol表达升高。
　　 ②VEGF:对照组CNE-1移植瘤VEGF的表达高于CNE-1/taxol;经紫杉醇处理后CNE-1移植瘤表达降低,CNE-1/taxol表达升高;经顺铂处理后CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤表达均无明显变化;
　　 ⑨TSP1:对照组CNE-1移植瘤TSP1的表达高于CNE-1/taxol;经紫杉醇处理后CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤表达均降低;经顺铂处理后CNE-1移植瘤表达无明显变化,CNE-1/taxol表达明显升高。
　　 结论:
　　 1.新鲜组织块接种法是建立人鼻咽癌CNE-1及CNE-1/taxol裸鼠皮下移植瘤模型的较好方法。
　　 2.紫杉醇、顺铂均对裸鼠人鼻咽癌CNE-1移植瘤的生长有明显的抑制作用,是两种针对鼻咽癌有效的化疗药物。
　　 3.人鼻咽癌CNE-1/taxol种植于裸鼠皮下后,仍对紫杉醇耐药,顺铂可逆转其耐药性。
　　 4.CNE-1移植瘤生长较CNE-1/taxol快,可能与其高表达Bcl-2、VEGF有关。
　　 5.鼻咽癌紫杉醇耐药与TSP1低表达有关,顺铂可通过升高TSP1的表达逆转鼻咽癌紫杉醇耐药。

目录

文摘

英文文摘

第一章 前言

第二章 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 统计学处理

第三章 结果

3.1 细胞悬液接种法裸鼠皮下移植瘤生长情况

3.2 新鲜组织块接种法裸鼠皮下移植瘤生长情况

3.3 移植瘤解剖学和组织学特点

3.4 各组鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤的生长情况

3.5 紫杉醇组及顺铂组裸鼠用药反应

3.6 CNE-1/TAXOL对紫杉醇及顺铂敏感性

3.7 BCL-2,VEGF,TSP1基因在各组移植瘤的表达差异

第四章 讨论

4.1 移植肿瘤模型的发展和建立意义

4.2 成瘤影响因素分析

4.3 CNE-1及CNE-1/TAXOL移植瘤的生长速度比较

4.4 CNE-1及CNE-1/TAXOL移植瘤对紫杉醇敏感性研究

4.5 CNE-1及CNE-1/TAXOL移植瘤对顺铂敏感性研究

4.6 BCL-2,VEGF,TSP1基因在各组移植瘤表达差异的意义

第五章 结论

参考文献

综述:细胞膜介导肿瘤耐药机制的研究进展

致谢

攻读学位期间的研究成果