纳米羟基磷灰石悬浮液对人牙周膜成纤维细胞增殖及细胞周期影响的研究

摘要

目的：
　　 1、初步探讨纳米羟基磷灰石悬浮液对人牙周膜成纤维细胞的作用,为纳米羟基磷灰石应用于牙周病的治疗提供依据。
　　 2、为本课题组今后研究纳米及介孔材料载药后对相关成纤维细胞的凋亡影响做准备。
　　 方法：
　　 1.利用组织块培养法培养、鉴定并传代人牙周膜成纤维细胞,利用第4～6代成纤维细胞进行实验。
　　 2.实验室制备纳米羟基磷灰石,利用羧甲基纤维素钠、六偏磷酸钠作为分散剂,进行对比,观察两种分散剂对纳米羟基磷灰石的分散效果,并进行简单的细胞培养,对比细胞生长情况,选择合适的分散剂。
　　 3.采用分散剂对纳米羟基磷灰石进行分散,制备1％浓度的纳米羟基磷灰石悬浮液,分别稀释至0.5％、0.25％、0.1％、0.05％、0.025％,并设置单独0.1％浓度的纳米羟基磷灰石组、单独0.1％浓度的羧甲基纤维素钠组、0.005％介孔硅组、0.01％氢氧化钙组及空白对照组,对人牙周膜成纤维细胞各培养24h、48h、72h后,用MTT法对各组细胞增殖情况进行测定,评价各组对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。
　　 4.选取0.5％浓度的悬浮液与各对照组继续细胞培养48h,将各组培养后的细胞,采用流式细胞术检测细胞周期分布情况,分析各组对人牙周膜成纤维细胞的细胞周期影响。
　　 结果：
　　 1.成功培养出人牙周膜成纤维细胞,经抗波形幺幺蛋白、抗角蛋白染色确定:抗波形幺幺蛋白阳性,抗角蛋白阴性。
　　 2.实验室采用化学沉淀法制备出纳米羟基磷灰石,经粒径检测所得纳米弪基磷灰石粒径在20-40 nm符合本次实验所需。通过比较六偏磷酸钠和羧甲基纤维素钠的对纳米羟基磷灰石的分散效果,可以得出六偏磷酸钠能更好地分散纳米羟基磷灰石,但进行细胞培养时,采用六偏磷酸钠分散纳米羟基磷灰石进行培养却导致了大量人牙周膜成纤维细胞的死亡,而羧甲基纤维素钠分散的纳米羟基磷灰石组细胞生长良好。因此选用羧甲基纤维素钠作为分散剂配置纳米羟基磷灰石悬浮液,进行后续实验。
　　 3.MTT法检测不同浓度的分组以及多重对照组的细胞增殖情况,发现0.5％浓度的纳米羟基磷灰石悬浮液组对细胞增殖情况较其他组效果明显。在相同浓度(0.1％)下,纳米羟基磷灰石悬浮液组对细胞的增殖作用优于单独纳米羟基磷灰石组。
　　 4.采用流式细胞术检测结果显示纳米羟基磷灰石悬浮液组可以减少处于G0/G1期的细胞数量,增加处于S期的细胞数量,使人牙周膜成纤维细胞在细胞增殖周期中很快完成G0/G1期向S的过渡。
　　 结论：
　　 1.纳米羟基磷灰石悬浮液对人牙周膜成纤维细胞的增殖有明显的促进作用。在细胞培养允许的渗透浓度内,浓度越高对细胞增殖的促进作用越明显,而且纳米羟基磷灰石对人牙周膜成纤维细胞增殖的促进作用在前24h最为明显。
　　 2.纳米羟基磷灰石悬浮液作用于人牙周膜成纤维细胞,可以缩短细胞处于G0/G1的时间,使较大量的细胞进入S期,进行有丝分裂,加速了HPDLCs的增殖速度。
　　 3.通过本研究,进一步肯定了nHA运用于牙周软组织重建的可能,为nHA运用于牙周病的治疗提供了参考依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略语表

前言

第一章:HPDLCs的培养

1.1 引言

1.2 材料与方法

1.3 结果

1.4 讨论

第二章:nHA的制备

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.3 结果

2.4 讨论

第三章:nHA悬浮液的制备

3.1 引言

3.2 材料和方法

3.3 结果

3.4 讨论

第四章:nHA悬浮液对HPDLCs增殖的影响

4.1 引言

4.2 材料和方法

4.3 结果

4.4 讨论

第五章:nHA悬浮液对HPDLCs细胞周期的影响

5.1 引言

5.2 材料和方法

5.3 结果

5.4 讨论

第六章:结论

参考文献

综述:纳米羟基磷灰石在口腔医学中的研究进展

附图

致谢