甘草酸二铵对脑死亡状态下大鼠肝脏影响的实验研究

摘要

第一章：大鼠脑死亡模型的建立及相关实验研究
　　 目的:应用颅内高压法建立大鼠脑死亡模型来复制临床脑死亡状态，并将爆发式和渐进式颅内高压脑死亡模型进行比较，为研究脑死亡提供稳定、简便、可重复和可控制的建模方式。
　　 方法:SD大鼠30只，随机分为对照组(A组)10只、爆发式脑死亡组(B组)10只和渐进式脑死亡组(C组)10只，A组在麻醉后行动脉插管、气管插管及颅骨钻孔置管，但不行颅内加压。B组麻醉后行动脉插管、气管插管及颅骨钻孔置管，后行颅内球囊以16μl/min的速度加压。C组麻醉后行动脉插管、气管插管及颅骨钻孔置管，后行颅内球囊以4μl/min的速度加压，在呼吸机维持下，生物机能实验系统监测大鼠脑死亡状态6 h，实验过程中监测动脉压及心率的变化，并比较建模手术成功率。
　　 结果:脑死亡组建立了颅内高压脑死亡模型，并诱导成功16只，诱导后期动脉压及心率骤然升高，后逐渐下降，其中B组急剧下降，幅度明显，且有3只因动脉压过低剔除研究，而C组下降幅度缓慢；与A组比较，脑死亡组谷值和峰值时动脉压及心率的差异均具有统计学意义，手术成功率B组70％(7/10)小于C组90％(9/10)。
　　 结论:应用颅内高压法能成功建立稳定可靠的大鼠脑死亡模型，其中渐进式颅内高压脑死亡模型有更高的手术成功率。
　　 第二章：脑死亡状态对大鼠肝脏损伤的实验研究
　　 目的:建立大鼠颅内高压脑死亡模型，并观察脑死亡状态对肝脏形态、功能及免疫原性的影响，为探讨改善脑死亡供体器官质量提供理论依据。
　　 方法:SD大鼠24只，随机分为对照组(12只)和脑死亡组(12只)，对照组在麻醉后行动脉插管、气管插管及颅骨钻孔置管，但不行颅内加压。脑死亡组建立渐进式颅内高压脑死亡模型，呼吸机维持下，在脑死亡诱导成功后分别于0h、2h、4h、6h取标本，抽血测ALT、AST，肝组织行组织病理学检查，免疫组化法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及主要组织相容性复合体-Ⅱ(MHC-Ⅱ)的表达，对照组麻醉维持，在对应时间点取标本进行比较。
　　 结果:脑死亡组中血清ALT及AST的水平和肝组织TNF-α及MHC-Ⅱ的表达水平均较对照组升高，脑死亡诱导后肝组织病理学检查示肝细胞变性，而且随着诱导时间的延长，变化越明显。脑死亡组与对照组在相应时间点的检测水平差异均具有统计学意义(P<0.05)。
　　 结论:大鼠脑死亡状态对肝脏形态及功能有损伤性变化，且能促进TNF-α及MHC-Ⅱ的表达，随着脑死亡状态维持越长，损伤程度越重，表达越明显。
　　 第三章：甘草酸二铵对脑死亡大鼠肝脏保护作用的实验研究
　　 目的:建立大鼠颅内高压脑死亡模型，诱导成功后给予甘草酸二铵注射液来研究其对脑死亡肝脏的保护作用，并探讨甘草酸二铵低浓度、中浓度和高浓度三种不同剂量对脑死亡肝脏保护作用的强弱，为临床研究脑死亡供体保护提供重要理论依据。
　　 方法:将25只SD大鼠随机分为三组：对照组(A组)5只、脑死亡组(B组)5只和甘草酸二铵处理组(C组)15只，A组在麻醉后行动脉插管、气管插管及颅骨钻孔置管，但不行颅内加压。B组与C组建立渐进式颅内高压脑死亡模型，C组在脑死亡诱导后从股静脉泵人甘草酸二铵注射液，给予剂量分别为10mg/kg(低浓度)、20mg/kg(中浓度)和30mg/kg(高浓度)，每个剂量组各5只，在脑死亡诱导后4h取标本，各组下腔静脉取血检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，取肝组织行}玎巳染色及免疫组化法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及主要组织相容性复合体-Ⅱ(MHC-Ⅱ)的表达，TUNEL法检测肝细胞凋亡。
　　 结果:B组及C组中血清ALT及AST的水平、肝组织TNF-α及MHC-Ⅱ的表达水平和肝组织细胞凋亡指数AI均较A组升高；C组中血清ALT及AST的水平、肝组织TNF-α及MHC-Ⅱ的表达水平和肝组织细胞凋亡指数AI均较B组低，而且C组中中浓度组降低更明显；脑死亡诱导后B组及C组肝组织病理学检查示肝细胞变性；C组肝组织病理学检查示肝细胞变性较B组少，且中浓度组减少更明显。各组差异均具有统计学意义。
　　 结论:大鼠脑死亡状态对肝脏形态及功能有损伤性变化，甘草酸二铵处理对脑死亡肝脏有保护作用，能抑制肝组织TNF-α及MHC-Ⅱ的表达，能减少肝细胞凋亡，且中浓度的甘草酸二铵对脑死亡肝脏保护作用更强。