血管紧张素Ⅱ通过JNK/c-Jun途径调节DDAH/ADMA/NO系统的研究

摘要

目的:本课题利用体外培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilicalvein endothelial cells，HUVECS)，观察ANGⅡ处理下，细胞内JNK/c-Jun通路的激活情况，并通过抑制JNK/c-Jun通路，观察下游SREBP-1、DDAH-1蛋白质水平的变化及ADMA和NO水平的变化，从而探讨JNK通路在ANGⅡ影响DDAH/ADMA/NOS系统中的作用，为阐明ANGⅡ引起NO水平变化提供新的视角。
　　 方法:体外培养细胞株HUVECs，同步化处理后，加入不同浓度的ANGⅡ，孵育24小时，用Western blot检测p-JNK，p-c-Jun表达水平的改变，从而观察有无JNK/c-Jun信号通路的激活。以最大程度激活JNK/c-Jun通路的ANGⅡ处理浓度为最佳处理浓度。加入上述最佳处理浓度的ANGⅡ处理HUVECS不同时间，用Western blot检测p-JNK，p-c-Jun表达水平的改变，找出可以最大程度激活JNK通路的ANGⅡ最佳处理时间。用以上最佳处理浓度与处理时间的ANGⅡ处理HUVECs，用Western Blot检测p-c-Jun，SREBP-1，DDAH-1水平。用高效液相色谱法测定细胞上清液中ADMA水平，DDAH总活性。硝酸还原酶法测定细胞上清液中NO水平。用JNK阻断剂SP600125处理内皮细胞后，用Western Blot检测p-c-Jun，SREBP-1，DDAH-1水平。用高效液相色谱法测定细胞上清液中ADMA水平，DDAH总活性。硝酸还原酶法测定细胞上清液中NO水平。
　　 结果:与对照组相比，不同浓度与时间ANGⅡ处理下，JNK与c-Jun的磷酸化水平表达均增高。在ANGⅡ处理浓度为10-6M，处理时间为24小时时，JNK与c-Jun的磷酸化表达达到高峰。表明在HUVECS中，ANGⅡ可引起JNK/c-Jun通路的激活。在对ANGⅡ影响下，JNK通路对SREBP-1，DDAH-1 DDAH总活性，ADMA含量，NO含量调节的研究中发现:(1)与无抑制剂处理组相比，加入JNK抑制剂SP600125处理后，SREBP-1表达无明显差异，表明JNK通路在HUVECS中不参与对SREBP-1的调节。(2)与无抑制剂处理组相比，;加入JNK抑制剂SP600125处理后，DDAH-1的表达明显增高，表明JNK通路参与调节ANGⅡ引起的DDAH-1表达降低。(3)与无抑制剂处理组相比，加入JNK抑制剂SP600125处理后，DDAH活性明显增高，ADMA含量降低，NO含量增高，表明阻断JNK通路参与调节ANGⅡ导致的DDAH活性下降，ADMA聚积，NO生成减少。
　　 结论:1.ANGⅡ在HUVECS中可引起JNK通路的激活。2.JNK/c-Jun通路不参与HUVECS中SREBP-1的表达调节3.JNK/c-Jun通路参与调节ANGⅡ引起的DDAH-1表达降低。4.JNK/c-Jun通路参与ANGⅡ对DDAH活性，ADMA及NO含量的调节。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 对象，试剂及仪器

2．2 方法

第三章．结果

3．1 不同浓度ANG Ⅱ处理下，HUVECS中JNK通路及下游c-Jun激活的情况

3．2 不同ANG Ⅱ处理时间下，HUVECS中JNK通路及下游c-Jun激活的情况

3．3 JNK抑制剂SP600125对HUVECS中SREBP-1的表达的影响

3．4 JNK抑制剂SP600125对HUVECS中DDAH-1的表达的影响

3．5 JNK抑制剂SP600125对HUVECS上清液中ADMA含量的影响

3．6 JNK抑制剂SP600125对HUVECS中DDAH酶活性的影响

3．7 JNK抑制剂SP600125对HUVECS上清液中NO含量的影响

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述

致谢