OPN对体外培养的人膝骨关节炎软骨细胞蛋白多糖和Ⅱ型胶原表达的影响

摘要

目的:探讨骨桥蛋白(OPN)对体外培养人膝OA软骨细胞蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA表达的影响，为明确OA发病机理及防治提供理论依据。
　　 方法:1、体外培养人膝OA软骨细胞;2、取第一代人膝OA软骨细胞，分为空白对照组（A组）和实验组（B组和C组），B组加入重组OPN100ng/m干预48h，C组加入重组OPN1μg/ml干预48h，A组未予任何干预继续培养48h，3、用Real-time PCR测量蛋白多糖与Ⅱ型胶原的mRNA的表达量。
　　 结果:1、与A组相比，B组人膝OA软骨细胞蛋白多糖mRNA表达水平（2.819±1.175倍）上升，两者之间差异具有统计学意义(p＜0.05)
　　 2、与A组相比，C组人膝OA软骨细胞蛋白多糖mRNA表达水平（3.731±0.607倍）上升，两者之间差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 3、B组与C组人膝OA软骨细胞蛋白多糖mRNA表达水平相比，两者之间差异具有统计学意义(P＜0.05)，C组人膝OA软骨细胞蛋白多糖mRNA表达水平高于B组。
　　 4、人膝OA软骨细胞蛋白多糖mRNA表达水平与OPN干预浓度呈正相关（r=0.751 P＜0.01）。
　　 5、与A组相比，B组人膝OA软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达水平（2.886±0.658倍）上升两者之间差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 6、与A组相比，C组人膝OA软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达水平（4.725±2.895倍）上升，两者之间差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 7、B组与C组人膝OA软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达水平相比，两者之间差异具有统计学意义(P＜0.05)，C组人膝OA软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达水平高于B组。
　　 8、人膝OA软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达水平与OPN干预浓度呈正相关（r=0.676 P＜0.01）。
　　 结论:1、OPN上调人膝OA软骨细胞蛋白多糖mRNA的表达，人膝OA软骨细胞蛋白多糖mRNA表达水平与OPN干预浓度呈正相关。
　　 2、OPN上调人膝OA软骨细胞的Ⅱ型胶原mRNA的表达，人膝OA软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达水平与OPN干预浓度呈正相关。

目录

声明

摘要

缩略词

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1．材料

2．1．1 主要实验仪器

2．1．2 主要实验试剂

2．1．3 实验标本来源

2．2 方法

2．2．1 人膝OA软骨细胞体外培养及鉴定

2．2．2 OPN对人膝OA软骨细胞蛋白多糖和Ⅱ型胶原表达影响分组与检测

2．2．3 统计分析

第三章 实验结果

3．1 原代人膝OA软骨细胞培养

3．1．1 人膝OA软骨细胞生长情况

3．1．2 人膝OA软骨细胞鉴定

3．1．3 人膝OA软骨细胞存活率鉴定

3．2 人膝OA软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的mRNA表达

3．2．1 mRNA检测

3．2．2 Realtime Q PCR引物熔解曲线

3．2．3 Realtime Q PCR扩增曲线

第四章 讨论

结论

参考文献

综述

致谢