姜黄素对口腔黏膜下纤维性变SD大鼠模型抗纤维化作用及机制的研究

摘要

背景与目的：
　　 口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis， OSF)是发生于口腔黏膜的一种慢性、隐匿性疾病，其发病与咀嚼槟榔习惯关系密切，已经被世界卫生组织定义为癌前状态。与其他纤维化疾病一样，OSF目前尚无特效的治疗方法。同时合适动物模型的缺乏已经制约了对其具体病因、发病机制及治疗方法的进一步研究。
　　 姜黄素是中药姜黄的主要活性成分，已有报道称其具有较好的抗纤维化的作用。本研究拟通过局部注射博来霉素(Bleomycin，BLM)制备出重复性较好的OSF动物模型，然后在此基础上结合体外实验探讨姜黄素用于治疗OSF的可行性及作用机理。
　　 方法：
　　 首先，进行动物模型的制备。SD大鼠100只，随机分为正常组、对照组和实验组。实验组大鼠在异氟烷的麻醉状态下，于双侧颊黏膜下注射BLM稀释液，每天一次，共持续八周。对照组采用磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline，PBS)代替BLM稀释液。正常组不给任何干预。在规定时间处死大鼠后，采用HE染色、masson染色、羟脯氨酸碱水解法、免疫组化、western blotting及透射电镜分别检测各组大鼠颊黏膜组织病理、胶原水平、肌成纤维细胞(myofibroblast，MFB)、TGF-β1、IFN-γ及超微结构的变化情况。
　　 然后，SD大鼠35只，随机分为正常组、对照组、低剂量姜黄素组和高剂量姜黄素组。正常组大鼠不给予任何干预。其余大鼠在颊黏膜局部注射BLM4周后，采用不同剂量的姜黄素模型大鼠进行灌胃4周。大鼠处死后，采用HE染色、免疫组化和western blotting观察其颊黏膜组织病理、MFB、胶原水平、TGF-β1、IFN-γ和IL-13的表达水平。
　　 最后，采用体外细胞原代培养的方法，培养人正常颊黏膜成纤维细胞(fibroblast，FB)，并利用TGF-β1将其诱导成为MFB表型。不同浓度姜黄素干预后，利用MTT、流式细胞术、western blotting及ELISA分别观察细胞增殖、细胞周期、凋亡、相关凋亡蛋白及上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变。
　　 结果：
　　 1、SD大鼠颊黏膜局部注射1mg/ml的BLM8周可以诱导出临床和病理上与人OSF相似的改变;
　　 2、较高剂量姜黄素可以降低BLM局部注射4周（病理改变接近人OSF早、中期）的SD大鼠颊黏膜组织中TGF-β1和IL-13的表达，提高IFN-γ的表达，减少MFB;但对Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变不明显;
　　 3、2.5-40μM的姜黄素可以抑制体外培养的FB和MFB增殖，且对MFB的抑制作用更加明显，并且将MFB阻滞在G0/G1期。10-40μM的姜黄素可以诱导MFB凋亡，提高Bax蛋白的表达，降低Bcl-2蛋白的表达，降低其上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平。
　　 结论：
　　 1、SD大鼠颊黏膜局部注射1mg/ml的BLM8周可以制备出类似人OSF病变的实验性OSF大鼠模型;该模型制作快捷，重复性好，但仍然存在一定的局限性。
　　 2、姜黄素可以改善1 mg/ml BLM颊黏膜局部注射4周的（病理改变接近人OSF早、中期）SD大鼠的张口度，降低主要致纤维化细胞因子TGF-β1的表达，阻止纤维化的进一步发展;
　　 3、在体外姜黄素可以通过抑制MFB增殖，促进其凋亡，减少Ⅰ、Ⅲ型胶原生成，发挥抗纤维化作用。

目录

声明

摘要

英文缩写与注解

第一章 实验性SD大鼠口腔黏膜下纤维性变模型的建立

1．1 前言

1．2 材料与方法

1．3 结果

1．4 讨论

1．5 结论

第二章 姜黄素对实验性口腔黏膜下纤维性变SD大鼠模型抗纤维化作用的研究

2．1 前言

2．2 材料与方法

2．3 结果

2．4 讨论

2．5 结论

第三章 姜黄素对TGF-β1诱导的人颊黏膜肌成纤维细胞抑制作用的初步研究

3．1 前言

3．2 材料与方法

3．3 结果

3．4 讨论

3．5 结论

参考文献

综述

致谢

攻读博士学位期间的研究成果