SPCA1在全脑缺血再灌注SD大鼠脑组织中的表达变化及与钙超载的关系研究

摘要

目的：
　　 分析SPCA1在全脑缺血-再灌注SD大鼠脑组织神经细胞中的表达，并探讨其与脑组织缺血再灌注过程中胞内Ca2+浓度的可能关系。
　　 方法：
　　 通过阻塞大鼠四血管（双侧椎动脉，双侧颈总动脉）建立SD大鼠的全脑缺血-再灌注模型;将120只（均为雄性、体重为200±20g）大鼠随机分为正常对照组，假手术组，缺血组和再灌注组（再灌注3小时、6小时、24小时、3天、7天）。随后按缺血-再灌注不同时间点分别处死动物，快速取脑组织制成标本。采用苏木精-伊红(H-E)和尼氏(Nissl)染色方法观察神经细胞形态和数目的变化;采用免疫荧光抗体标记法鉴定SPCA1在皮层神经细胞中定位与表达强度，并采用Western Blot分析来予以补充验证;采用Fura-2负载的荧光分光光度法对匀浆后神经细胞内与分离高尔基膜泡内Ca2+浓度进行测定。全部数据用SPSS15.0进行统计分析。
　　 结果：
　　 1.全脑组织的H-E染色和海马区神经细胞的尼氏染色结果显示全脑缺血-再灌注导致脑组织大面积受损，皮层和海马区神经细胞数量明显减少,胞体肿胀且形态由多角形转变为近球形，;在再灌注后期，尤其是缺血再灌注7天后，皮层神经细胞周围形成空泡，海马区神经细胞分离脱失。
　　 2.SPCA1的荧光免疫定位和Western Blot的结果显示全脑缺血再灌注后SD大鼠脑组织各部分的神经细胞中SPCA1的表达水平呈现“低-高-低”的趋势，即缺血和再灌注3h的SPCA1水平偏低，而在再灌注6h迅速达到最高，而后缓缓下降至比正常水平低。
　　 3.Fura-2负载荧光分光光度法测定神经细胞内和分离高尔基膜泡内Ca2+浓度的结果显示胞内Ca2+浓度在缺血时即开始迅速升高，再灌注3h后即达到最高值，而后略有下降但仍然维持高于正常2倍以上的高浓度;分离高尔基体膜泡的Ca2+浓度则与胞内Ca2+浓度变化趋势相反，在缺血和再灌注早期浓度低，而再灌注24h后则处于高水平。
　　 结论：
　　 1.脑组织神经细胞的SPCA1水平与缺血-再灌注损伤存在明显的应答关系。
　　 2.脑组织神经细胞在缺血和再灌注过程中始终处于钙超载状态，但此状态在再灌注后期略有下降;结果提示高尔基体作为胞内钙库参与了钙超载的形成和缓解。
　　 3.结合SPCA1的表达模式和高尔基体在钙超载形成与缓解中的作用，可以认为高尔基体上的SPCA1在缺血-再灌注过程中对钙超载的缓解发挥了一定作用。

目录

声明

论文说明

摘要

主要英文缩略词表

前言

第一章 材料与方法

1．1 实验材料与仪器

1．2 实验步骤与方法

1．3 统计分析

第二章 结果

2．1 病理学结果

2．2 SPCA1表达分析结果

2．3 细胞质与高尔基膜泡内Ca2+浓度结果

2．4 图和表

第三章 讨论

3．1 缺血再灌注过程中高尔基体对神经细胞胞质Ca2+的调节作用

3．2 SPCA1的生物学特性及在高尔基体Ca2+调节中的作用

3．3 高尔基体对Ca2+稳态的调节及其对缺血再灌注伤害的应激

第四章 结论

参考文献

综述

致谢