羧甲基葡聚糖修饰磁性脂质体的制备及其应用研究

摘要

建立同时实现肿瘤诊断与治疗的多功能药物载体是人们的长期梦想。磁性脂质体是由磁性纳米材料和磷脂组装而成的，它整合了脂质体和磁性纳米粒子的多种功能特性如生物相容性、靶向性、表面可修饰性、可控性释放、磁共振造影等，是实现诊疗一体化的优良载体。然而，目前制备稳定性好、分散性单一、药物包封率高、磁响应性好、具有成像功能的磁性脂质体还存在一定的困难。
　　针对上述问题，本文利用羧甲基葡聚糖(CMD)对脂质体进行表面修饰，制备出了稳定性较好的Fe3O4磁性脂质体，并研究了其在核磁共振成像中的应用及可控性释放，为其在诊疗一体化中的应用奠定了基础。
　　首先，采用共沉淀法制备出超顺磁性Fe3O4纳米粒子(SPIONs)。SPIONs平均粒径约为3 nm，饱和磁化强度为61.4 emu/g，具有超顺磁性。
　　然后，以大豆卵磷脂、羧甲基葡聚糖和胆固醇为膜材料，以SPIONs为磁性材料，采用薄膜分散和水化超声联用方法制备CMD修饰的磁性脂质体(CMD-MLs)。结果表明，CMD-MLs的饱和磁化强度为47.7 emu/g，粒径约为120 nm，4℃下可保存1个月以上，在血清中的稳定性也比较好。弛豫效率(r2/r1)为57，适合作为核磁共振成像中的T2造影剂。
　　最后，采用硫酸铵梯度法制备包覆阿霉素(DOX)的磁性脂质体(CMD-MLs-DOX)。DOX的包封率可达95％以上。在交变磁场作用下，随着磁场强度的增强和作用时间的延长，阿霉素的释放速率和累积释放百分率都不断提高。此外，阿霉素的释放还具有明显的pH敏感性，在pH5.0缓冲溶液中释放速率和累积释放百分率明显高于pH7.4的环境中，这有利于药物在肿瘤病灶区的释放。MTT实验表明，CMD-MLs-DOX对SH-SY5Y细胞具有较好的抑制作用。

目录

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摘要

第一章 绪论

1．1 引言

1．2 磁性脂质体概述

1．2．1 磁性脂质体的结构

1．2．2 磁性脂质体的分类

1．2．3 磁性脂质体的制备方法

1．3 磁性脂质体的应用

1．3．1 磁性脂质体在生物技术中的应用

1．3．2 磁性脂质体在核磁共振成像(MRI)中的应用

1．3．3 磁性脂质体在药物运载中的应用

1．3．4 磁性脂质体在热疗中的应用

1．4 磁性脂质体的研究进展及存在问题

1．4．1 研究进展

1．4．2 现存问题

1．5 本课题的研究背景及意义

第二章 超顺磁性Fe3O4纳米粒子(SPIONs)的制备与表征

2．1 引言

2．2 主要实验试剂及仪器设备

2．3 实验内容

2．3．1 Fe3O4纳米粒子的制备与修饰过程

2．3．2 Fe3O4纳米粒子的表征方法

2．4 结果与讨论

2．4．1 Fe3O4磁性纳米粒子的磁性分析

2．4．2 X射线衍射

2．4．3 Fe3O4磁性纳米粒子的粒径和ζ电位

2．4．4 Fe3O4磁性纳米粒子的形貌

2．4．5 Fe3O4磁性纳米粒子的透射电子显微镜

2．5 本章小结

第三章 羧甲基葡聚糖修饰磁性脂质体的制备与表征

3．1 引言

3．2 主要实验试剂及仪器设备

3．3 实验内容

3．3．1 羧甲基葡聚糖修饰的磁性脂质体的制备过程

3．3．2 CMD-MLs的表征方法

3．4 结果与讨论

3．4．1 两亲性CMD的接枝度

3．4．2 CMD-MLs的粒径分布和ζ电位

3．4．3 CMD-MLs的VSM表征

3．4．4 CMD-MLs的XRD研究

3．4．5 CMD-MLs的形貌结构

3．4．6 CMD-MLs在血清中的稳定性

3．4．7 CMD-MLs的弛豫性质

3．4．8 磁共振成像

3．5 本章小结

第四章 阿霉素磁性脂质体的药物负载性质和抗肿瘤性能研究

4．1 引言

4．2 主要实验试剂及仪器设备

4．3 实验内容

4．3．1 羧甲基葡聚糖修饰阿霉素磁性脂质体(CMD-MLs-DOX)的制备

4．3．2 CMD-MLs-DOX的理化性质基本表征

4．3．3 CMD-MLs-DOX的包封率检测

4．3．4 CMD-MLs-DOX在交变磁场的作用下的释放性能研究

4．3．5 CMD-MLs-DOX的体外细胞毒性研究

4．4 结果与讨论

4．4．1 CMD-MLs-DOX的粒径、ζ电位和分布系数

4．4．2 CMD-MLs-DOX的形貌结构

4．4．3 阿霉素(DOX)的包封率

4．4．4 CMD-MLs-DOX在交变磁场作用下的释放研究

4．4．5 CMD-MLs-DOX的细胞毒性试验

4．5 本章小结

总结与展望

参考文献

攻读硕士学位期间主要的研究成果

致谢