HCV NS3解旋酶RNA对HCV自身翻译具有抑制作用

摘要

丙型肝炎病毒是丙型肝炎的病原体，可导致慢性肝炎、肝硬化，部分可发展成肝癌。目前较为认可的治疗方案是干扰素联合利巴韦林，但它的副作用较大，花费较高，持续应答率较低。因此，寻找更为有效的抗HCV治疗方法迫在眉睫。由于HCV在体内复制水平低，难以建立一个令人满意的高效体外复制、感染模型。因此，对HCV生活周期以及其内部基因表达调控的研究显得非常重要。本课题在研究HCV NS3解旋酶对HCV IRES的翻译启动活性的影响，并试图探讨HCV翻译自身调控的机制。
　　方法:(1)构建HCV NS3全长和HCV NS3解旋酶表达质粒;构建HCV NS3解旋酶的突变型及其表达缺陷质粒;(2)以HCVIRES调控荧光素酶表达的质粒pCMVNCRLuc转染293T细胞模型作为研究体系，利用磷酸钙转染方法，将构建的质粒转染到该细胞中，转染24h后检测荧光素酶表达活性;(3)提取细胞RNA，RT-PCR检测pCMVNCRLuc、细胞IFN-β和PKR的mRNA的相对表达。
　　结果:(1)质粒酶切鉴定和测序结果证明正确构建了HCVNS3解旋酶及其突变型和表达缺陷质粒;(2)体外细胞转染，HCVNS3解旋酶及其突变型表达质粒均可抑制转染细胞的荧光素酶表达，HCV NS3解旋酶表达缺陷质粒同样可抑制转染细胞的荧光素酶活性;(3) RT-PCR检测显示，转染细胞中质粒pCMVNCRLuc和转染内参质粒pRL-TK mRNA的相对表达水平无显著性差异;细胞中未检测出IFN-β表达，PKR mRNA的相对表达水平无显著性差异。
　　结论:(1)成功构建了HCV NS3解旋酶及其突变型以及表达缺陷真核表达质粒;(2) HCV NS3解旋酶RNA可抑制HCV IRES的翻译启动活性;(3) HCV NS3解旋酶RNA对HCV IRES翻译启动活性的抑制不是通过提高PKR的表达水平发挥作用，具体机制有待进一步研究。