原发性干燥综合征外周血CD4+T细胞FOXP3基因DNA甲基化异常的研究

摘要

目的:DNA甲基化异常在系统性红斑狼疮(SLE)、系统性硬皮病(SSC)等自身免疫性疾病的发病中起着重要作用。Treg细胞能介导机体自身免疫耐受，在自身免疫性疾病的发生中起保护作用。转录因子FOXP3对Treg的增殖分化及正常功能的维持起关键作用。有研究表明FOXP3在自身免疫性疾病中表达异常且与DNA甲基化异常相关。本课题主要通过研究原发性干燥综合征(primary Sj(o)grensyndrome，pSS)患者外周血CD4+T细胞中FOXP3基因的表达水平及其甲基化状态，从而探讨表观遗传学在pSS发病中的作用。
　　方法:取pSS患者、正常人外周血，用密度梯度离心法分离得到单个核细胞，进一步用磁珠法分选得到CD4+T细胞。分别采用实时定量聚合酶链反应(real-time RT-PCR)和Western blot检测CD4+T细胞中FOXP3的mRNA和蛋白表达水平，亚硫酸氢钠测序法检测FOXP3基因启动子区域的甲基化状态。
　　结果:与健康对照相比，pSS患者CD4+T细胞FOXP3 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.01;P＜0.01); FOXP3基因启动子区域的DNA甲基化水平显著升高(P＜0.01)，并且FOXP3启动子区域甲基化水平与mRNA和蛋白表达呈显著负相关(P＜0.05; P＜0.05)。
　　结论:DNA甲基化参与调控pSS患者CD4+T细胞中FOXP3表达;pSS患者FOXP3基因调控序列高甲基化可能在pSS发病中发挥重要作用。